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檸檬可樂星新蟲 (小有名氣)
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[求助]
為什么不能用PCR克隆之后再PCR的陽性產(chǎn)物直接測序？
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各位大俠：本人剛開始學做分子，菜鳥一枚。之前PCR得到的產(chǎn)物直接測序結(jié)果不好，想做一下克隆。我看克隆的操作步驟中，挑取一些單克隆做菌落PCR，然后PCR結(jié)果為陽性的菌落再培養(yǎng)，拿養(yǎng)好的菌液送測序。 我不是很了解菌液測序的原理，很好奇 為什么不能用 結(jié)果為陽性的菌落PCR產(chǎn)物直接測序，而是要再養(yǎng)菌，用菌液測序呢？ 多謝指點！ |
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cicelyzh
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
檸檬可樂星: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 解釋的非常詳細 多謝 2013-12-05 08:22:43
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| PCR說白了就是體外復制DNA，會有出錯的可能，尤其是PCR條件控制不嚴格的時候。細菌的DNA復制有嚴格的控制機理，尤其是用于克隆的工程菌株，質(zhì)粒的復制幾乎可以說不會出錯。你已經(jīng)克隆到菌里，目的是測定載體里攜帶的序列是否正確，用PCR產(chǎn)物測序如果出錯可能是做菌落PCR時 的錯誤，你仍然無法得知克隆的序列是否正確。用菌液測序是公司自己從菌里提模板進行測序，避免PCR獲取模板時可能出現(xiàn)的錯配。 |
2樓2013-12-05 07:44:02
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