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冰雪靈魂木蟲 (著名寫手)
食品科學(xué)家族族長(zhǎng)
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[求助]
熒光定量PCR如何進(jìn)行絕對(duì)定量？ 已有2人參與
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real-time PCR 分絕對(duì)定量和相對(duì)定量，我做的是絕對(duì)定量。絕對(duì)定量需要繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 標(biāo)曲的恒坐標(biāo)是基因拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值 縱坐標(biāo)是CT值。 問題一：跑樣品得到CT值后 如何從基因濃度換算回活菌數(shù)。（我做的是要這種PCR測(cè)定干酪樣品中雙歧桿菌的活菌數(shù)） 問題二：用標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線。我的標(biāo)準(zhǔn)品就是純培養(yǎng)的雙歧桿菌嗎？從菌體中提取DNA ? 問題三：在四樓人做的都是提rna,我看文獻(xiàn)中寫的都是提DNA，還有文獻(xiàn)提的是將目的基因轉(zhuǎn)到大腸菌的質(zhì)粒中 然后再提質(zhì)粒，有什么區(qū)別？ 問題四：需要特異性引物或者探針，如何設(shè)計(jì)？ |
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2樓2019-03-25 08:51:25
粒粒粥呀
金蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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首先你需要構(gòu)建準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品，目前我所遇到的標(biāo)準(zhǔn)品都是構(gòu)建了含目的基因的質(zhì)粒； 質(zhì)粒測(cè)濃度后可以根據(jù)公式換算成拷貝數(shù)（公式不太好貼，自行百度）； 標(biāo)準(zhǔn)品10倍倍比稀釋后檢測(cè)，根據(jù)不同稀釋度對(duì)應(yīng)的拷貝數(shù)和得到的CT值得出標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)應(yīng)的公式； 將待檢樣品的CT值帶入公式就可以得出樣品所含的拷貝數(shù)； 活菌數(shù)什么的我就不太懂了  |
3樓2019-03-26 18:04:03
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- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
4樓2019-11-27 10:31:11
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5樓2019-11-27 10:32:27
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