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[求助]
之前一直表達很好的一個蛋白表達不出來了，請求高手能給分析分析原因
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我的蛋白大小72Kd，連接在PET28a上，之前表達條件：IPTG：0.05mM，13℃誘導16h，目的蛋白在上清里能達到90%，而且表達量很大。我之前純化過半年，師姐純化過兩年，都從來沒有在上清里不表達的情況。現(xiàn)在是完全按照之前的條件純化包括所用溶液也是一模一樣，跑SDS膠發(fā)現(xiàn)只在沉淀里，上清里幾乎一點也沒有；我直接在收菌后用TBS重旋，破碎，離心，跑SDS膠也是一樣的結果；我也試過不同的誘導溫度也是一樣的結果�，F(xiàn)在是素手無策了 ，希望各位高手們能給點意見或是建議看 我問題可能出哪里了 |
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2樓2014-10-30 21:05:14
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