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黑色罌粟花新蟲 (初入文壇)
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[交流]
如何解決western blot實驗漏膠問，原因何在，如何解決！已解決！ 已有5人參與
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最近有不少人問這個問題，之前我也遇到過： 網(wǎng)上的提議和分析都很有道理，但是大多解決不了問題！ 漏膠：主要說的都是濃縮膠漏，條帶串聯(lián)的一起。主要是由于濃縮膠本身加入的丙烯酰胺少，形成的膠，容易干，容易收縮，從而與膠版之間形成縫隙。 解決辦法如下： 確保試劑正常，洗干凈板子。配制好濃縮膠之后，定時30分鐘，然后裝到電泳槽中，加入電泳液，浸沒梳子口部。定時30分鐘，之后可以上樣啦！ 就這樣問題就解決了！ 謝謝各位，不信你試試！ |
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 分子生化實驗經(jīng)驗積累 | 蛋白電泳 漏樣 |
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cathy521125
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cathy521125
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好吧，你可能說得有一定的意義，還主要指的是 串樣的問題。漏膠的主要原因是running gel凝結(jié)后取出來倒封膠的水或者乙醇等溶液時的操作，大家都是手拿板子正中，對板子的擠壓導致的板子兩側(cè)產(chǎn)生縫隙。只要是減輕變形量的操作都可以減少漏膠。所以倒stacking gel時漏。如果凝結(jié)好后取膠板，上電泳槽的操作中也是手在膠板中部用力，產(chǎn)生了膠和板子的縫隙，可能你的方法有幫助。從源頭解決的方法是從制膠器取板子，任何時候都是拿膠板最兩端！最后，除了制膠過程外，上樣操作過程本身產(chǎn)生串樣是更普遍的原因。如果用上樣專用的前端毛細管一樣的吸頭，問題很少，如果用普通的10ul 50ul吸頭上樣，很多時候本來想能盡量插入點樣孔中點樣，殊不知這樣的槍頭會將長短板撬開，你好好體會就知道了，稍微用點力，板子都和膠分開了，怎能不串樣呢？所以，用專用吸頭，或者，不要深入孔里面點樣，就在孔外面點，慢點讓樣品緩緩沉下去。還有一個技巧就是移液器不要90度垂直加樣，而是水平，這樣保證槍頭就算你用力也不會撬到兩玻璃板。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
7樓2016-08-31 19:58:21
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