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鏈霉菌基因組DNA的大提
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我有幾株鏈霉菌想要提取基因組DNA后做雜交，大提DNA的方法是改良的CTAB法，最后雖然提取的量比較少，但是能用玻璃棒攪絲，之后用70%的乙醇洗鹽，再之后風(fēng)干（風(fēng)干徹底），再之后用0.1xSSC溶解，卻溶解不了，SSC是最新配制的，而且第一次提取的時(shí)候出現(xiàn)不溶解的情況，又重新配制了ssc···第二次還是不溶解。求大神指導(dǎo)。 或者哪位大神之前大提過鏈霉菌的DNA，求方法啊，我已經(jīng)提了一個(gè)多月了，真心已經(jīng)黔驢技窮了··· |
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【答案】應(yīng)助回帖
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dgm1208: 金幣+100, ★有幫助, 10 2013-12-25 21:09:23
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dgm1208: 金幣+100, ★有幫助, 10 2013-12-25 21:09:23
| 跑電泳沒有條帶嗎？個(gè)人認(rèn)為可能是樣品里還存有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，可以再用氯仿-異戊醇抽提一下，樓主用的是什么方法提的，我們實(shí)驗(yàn)室一般用CTAB法，可以讓溶菌酶和蛋白酶多反應(yīng)一會(huì)，去除多余雜質(zhì)，希望對(duì)你有幫助 |
7樓2013-12-24 09:17:12
【答案】應(yīng)助回帖
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dgm1208: 金幣+30, ★★★很有幫助, 謝謝你哈，之前由于操作失誤把之前的100金幣都給了bikexmx，又追加的，金幣不多，謝謝你 2013-12-26 18:19:51
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方法一：如果這種菌能長成菌落 ，你就用寶生物的這個(gè)試劑盒來提一下（Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR），這個(gè)很便宜。 方法二：如果這個(gè)試劑盒不可以的話，你就用德國QIAGEN的試劑盒，這個(gè)大約1500，有點(diǎn)貴。 這些應(yīng)該沒有問題，你試試吧。 希望能幫到你 |
2樓2013-12-23 21:13:54
taoway
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3樓2013-12-23 22:04:00
taoway
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dgm1208: 金幣+70, ★★★★★最佳答案, 謝謝你哈，之前由于操作失誤把之前的100金幣都給了bikexmx，又追加的，金幣不多，謝謝你 2013-12-26 18:19:04
dgm1208: 金幣+70, ★★★★★最佳答案, 謝謝你哈，之前由于操作失誤把之前的100金幣都給了bikexmx，又追加的，金幣不多，謝謝你 2013-12-26 18:19:04
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不好意思，剛才在路上用手機(jī)回復(fù)的，發(fā)現(xiàn)全是亂碼。 我感覺你的問題出在DNA風(fēng)干，我們實(shí)驗(yàn)室提取鏈霉菌總DNA后，用75%乙醇脫鹽兩次，然后稍稍spin一下用移液槍吸掉液體，敞口在超凈臺(tái)或工作臺(tái)面放置幾分鐘至聞不到乙醇味道，隨后加水或TE溶解DNA。混勻一下在55度水浴鍋內(nèi)放置5-10分鐘促溶一下就可以了。注意一定不要將總DNA完全風(fēng)干！祝好運(yùn)！ |
4樓2013-12-23 22:36:06
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