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kongzhen1985新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
關(guān)于雙酶切的酶的失活問(wèn)題 已有4人參與
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最近實(shí)驗(yàn)要用到EcoRI和KpnI進(jìn)行雙酶切，且酶切以后需要進(jìn)行后續(xù)的連接反應(yīng)，EcoRI可以采用熱失活滅活，但是KpnI在網(wǎng)上搜索發(fā)現(xiàn)不能熱失活，想問(wèn)下有做過(guò)這方面的能幫分析下嗎？謝謝啦!!還有這兩個(gè)酶進(jìn)行雙酶切過(guò)夜可以嗎？ |
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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-25 12:19:48
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-12-25 12:19:48
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做完酶切必須要純化一下，因?yàn)槊盖袝?huì)引入一些離子，影響下面實(shí)驗(yàn)，且純化一下可以讓酶失活，不用熱失活，這不是一舉兩得嘛。純化雖然會(huì)損失一部分，但對(duì)下面實(shí)驗(yàn)還是有利的，否則你的實(shí)驗(yàn)后面出現(xiàn)問(wèn)題你都不知道咋回事。還是每一步都做好最好了，這樣不會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題。 還有酶切最好不要過(guò)夜切，大概一兩個(gè)小時(shí)就可以了。你用的酶我都用過(guò)，很好用，推薦你用fermentas公司的，酶都很好用，又便宜。 |
6樓2013-12-24 10:05:17
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3樓2013-12-24 00:30:13
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4樓2013-12-24 09:26:16
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