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答案24木蟲 (初入文壇)
高中
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[求助]
求助：內(nèi)參引物的問題 已有1人參與
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本人新手，剛剛做熒光半定量，確定內(nèi)參引物（退火溫度是58.4）的循環(huán)次數(shù)時(shí)，用的是混合樣品（雙平行），做了23 25 28的循環(huán)梯度，單獨(dú)跑電泳。條帶是這樣的（1）。我就選擇了25個(gè)循環(huán)次數(shù)，用六個(gè)不同的組織做熒光半定量（前面是目的基因，后六個(gè)是內(nèi)參引物）。出現(xiàn)了內(nèi)參基因的亮度不恒定，有弱有強(qiáng)（圖2），又跑了幾次電泳，甚至內(nèi)參跑不出來（圖三）。不知道為什么啊 求大俠指點(diǎn)迷津 圖2.jpg 圖一.jpg 圖3.jpg |
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cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
答案24(kx444555代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵(lì)交流 2014-01-03 09:45:06
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| 不同基因的循環(huán)數(shù)目需要分別摸索，不能只用一個(gè)。同一基因，考慮的樣品上調(diào)和下調(diào)的可能，實(shí)驗(yàn)時(shí)最好采用不同的循環(huán)數(shù)目，確保所有樣品得到理想的擴(kuò)增。實(shí)話說半定量確實(shí)有些麻煩，現(xiàn)在熒光定量已經(jīng)相當(dāng)普及，最好直接上熒光定量。 |
2樓2014-01-03 00:07:47
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