 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2649 | 回復(fù): 10 | ||
lingbi銀蟲 (正式寫手)
|
[求助]
引物設(shè)計實例分析 已有1人參與
|
|
|
發(fā)現(xiàn)一個很好的引物設(shè)計的PPT，傳上來跟大家分析一下，同時我有幾個點沒看懂，也想請明白的朋友給指點一下。 目的： 將plasmid 2上GFP基因擴下來連到plasmid 1 上 GFP基因 5’ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGC …………TCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAGTAA 3’ 問題一： Primer1: 5’ ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGC………….. Primer2: 5’ Sample TextTTACTTGTACAGCTCGTCCATGCCGAGA……. 引物2 TTA為什么去掉？不需要終止密碼子嗎？ 問題二加酶切位點后： Primer1: 5’ ggatccTATGGTGAGCAAGGGCGAGGA 添加酶切位點后為什么在primer1的酶切位點后面加個 T 呢？是為了三個一組ATG剛好一組嗎？為什么加的是T不是別的？ Primer2: 5’gg atc cctCTTGTACAGCTCGTCCATGCC為何在primer2的酶切位點后加CT？這有何講究？ 問題敘述的也許不清楚，請大俠 參看PPT給解釋一下吧。謝謝 |
回復(fù)此樓» 本帖附件資源列表
-
歡迎監(jiān)督和反饋：小木蟲僅提供交流平臺，不對該內(nèi)容負責。
本內(nèi)容由用戶自主發(fā)布，如果其內(nèi)容涉及到知識產(chǎn)權(quán)問題，其責任在于用戶本人，如對版權(quán)有異議，請聯(lián)系郵箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 引物設(shè)計實例分析.ppt
2014-01-03 15:21:18, 215 K
» 本帖@通知
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有259人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關(guān)于一對引物同時擴增多個不同基因的問題
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 質(zhì)量源于設(shè)計（QbD）相關(guān)文獻小匯總
已經(jīng)有87人回復(fù)
- 【動畫】很經(jīng)典很華麗的PPT動畫設(shè)計案例
已經(jīng)有840人回復(fù)
- 曝氣池的有效水深和設(shè)計高度
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【資源】光學(xué)設(shè)計經(jīng)典教材---非球面設(shè)計，加工與檢驗
已經(jīng)有19人回復(fù)
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵交流！ 2014-01-05 15:18:33
gyesang: 回帖置頂 2014-01-05 15:18:35
lingbi: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-01-07 22:14:00
lingbi: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-01-07 22:14:14
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵交流！ 2014-01-05 15:18:33
gyesang: 回帖置頂 2014-01-05 15:18:35
lingbi: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-01-07 22:14:00
lingbi: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-01-07 22:14:14
|
1. TAA是終止密碼子，去掉的原因可能是要在基因后面融合表達標簽或者其他基因。用后面基因的終止密碼子就可以了。 2. 在酶切位點與ATG之間加堿基一般是考慮移碼的問題。情況大概是由于在這個基因前面有其他基因或者標簽需要融合表達。在基因的反向引物的酶切位點之后加堿基也是考慮移碼是問題，大概基因后面有表達標簽或者融合蛋白。具體是什么堿基問題不是很大。主要考慮不能形成終止密碼子。我想在這里用T的原因可能是調(diào)整引物的GC含量。 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
4樓2014-01-05 11:01:56
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
7樓2014-01-06 11:49:42
cicelyzh
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 1662 (講師)
- 金幣: 8693.8
- 紅花: 72
- 帖子: 3516
- 在線: 456小時
- 蟲號: 1614001
- 注冊: 2012-02-13
- 專業(yè): 生物化學(xué)
|
GC含量過高有可能導(dǎo)致PCR困難，一般設(shè)計引物時考慮在50%左右，其實高于60%的引物也能P出來。尤其是做有些克隆，引物選擇的自由度不是很大。只要能P出目的條帶就可以了。 大腸桿菌的基因型可以參考： http://openwetware.org/wiki/E._coli_genotypes 和TAKARA的免費資料 http://pan.baidu.com/s/1nt7CWI1 |
9樓2014-01-08 01:39:00
lingbi
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.5
- 帖子: 313
- 在線: 61.8小時
- 蟲號: 341544
- 注冊: 2007-04-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 疫苗學(xué)
2樓2014-01-04 10:02:48
lingbi
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.5
- 帖子: 313
- 在線: 61.8小時
- 蟲號: 341544
- 注冊: 2007-04-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 疫苗學(xué)
3樓2014-01-05 09:07:54
5樓2014-01-05 22:03:30
lingbi
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.5
- 帖子: 313
- 在線: 61.8小時
- 蟲號: 341544
- 注冊: 2007-04-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 疫苗學(xué)
送紅花一朵 |
解釋非常詳細，謝謝你。我還有問題 1、是Tm值、GC含量，PPT中看是未加酶切位點和保護堿基時就計算的，補加堿基防止移碼時補什么看GC含量，這是的GC含量是要計算一下含酶切位點什么的嗎？ 2、酶切位點、保護堿基中GC含量高，那么實驗中退火溫度（不含酶切位點算的Tm）是不是5個循環(huán)后提高溫度？提高多少合適？ 3、Primer1: 5’ cgcggatccTATGGTGAGCAAGGGCGAGGA 引物設(shè)計中說3‘端以A結(jié)尾不好，是不是直接去掉這個就行？出于簡并性考慮，引物3’端不要終止于密碼子第三位，可是從哪個地方開始數(shù)呢，這個引物擴增出的片段插入BamHI位點，是從GGATTC開始數(shù)嗎？ |
6樓2014-01-06 09:58:49
lingbi
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 581.5
- 帖子: 313
- 在線: 61.8小時
- 蟲號: 341544
- 注冊: 2007-04-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 疫苗學(xué)
8樓2014-01-07 22:22:49
 |
10樓2014-01-09 15:03:32
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 lingbi 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +3 | 元夕元 2026-03-20 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 336化工調(diào)劑 +3 | 王大坦1 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 +10 | 安全上岸！ 2026-03-16 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學(xué)材料工程專業(yè) 282分求調(diào)劑 +11 | 楓橋ZL 2026-03-18 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 315分，誠求調(diào)劑，材料與化工085600 +3 | 13756423260 2026-03-22 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289材料與化工（085600）B區(qū)求調(diào)劑 +3 | 這么名字咋樣 2026-03-22 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境學(xué)碩288求調(diào)劑 +6 | 皮皮皮123456 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南化學(xué)（0703）總分337求調(diào)劑 +9 | niko- 2026-03-19 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +6 | CX 330 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 【考研調(diào)劑】化學(xué)專業(yè) 281分，一志愿四川大學(xué)，誠心求調(diào)劑 +11 | 吃吃吃才有意義 2026-03-19 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)297求調(diào)劑 +3 | Daisy☆ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +12 | yangfz 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國石油大學(xué)（華東） 本科齊魯工業(yè)大學(xué) +3 | 石能偉 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +10 | S.H1 2026-03-18 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +4 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑求學(xué)校推薦 +3 | 伯樂29 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工 322求調(diào)劑
+4
|
然11 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 353求調(diào)劑 +3 | 拉鉤不許變 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|