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a83875785鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[交流]
用的pCDNA-5重組質(zhì)粒，通過測(cè)序檢驗(yàn)質(zhì)粒+目的基因是否構(gòu)建成功 已有2人參與
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| 用的pCDNA-5重組質(zhì)粒，通過測(cè)序檢驗(yàn)質(zhì)粒+目的基因是否構(gòu)建成功,測(cè)序結(jié)果顯示測(cè)序后的堿基序列是99%配對(duì)，氨基酸序列也是99%配對(duì)，用的是NCBI上的配對(duì)分析，請(qǐng)問這樣能判斷我的測(cè)序結(jié)果是我原來的目的基因嗎？ |
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a83875785
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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測(cè)質(zhì)粒得到的序列比測(cè)PCR產(chǎn)物得到的序列信息更全，準(zhǔn)確度更高，原因如下： 1.一個(gè)測(cè)序反應(yīng)一般可以測(cè)出的序列長(zhǎng)度有800bp左右，但是有一點(diǎn)要注意，從引物3'的位置以后約80bp的序列信息時(shí)測(cè)不出來的（可信度很低），這就導(dǎo)致你測(cè)PCR產(chǎn)物的話無法得到完整的序列信息，而測(cè)質(zhì)粒，引物一般會(huì)從載體上選擇來測(cè)目的片段的首尾序列，所以能夠測(cè)出完整的序列信息 2.PCR產(chǎn)物通過連接轉(zhuǎn)化整合到載體上并在受體菌中擴(kuò)增，每一個(gè)步驟都有一定概率的引起某個(gè)或某幾個(gè)堿基的突變，特別是當(dāng)片段內(nèi)有大量串聯(lián)重復(fù)片段的話在個(gè)別受體菌內(nèi)是容易被剪切和修改的，因此通過PCR產(chǎn)物測(cè)出的結(jié)果與測(cè)質(zhì)粒得到的結(jié)果并不完全一樣。 綜上，測(cè)重組質(zhì)粒得到的結(jié)果更可信！ |
2樓2014-01-10 16:45:49
zheng1991 
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3樓2014-01-11 17:00:49
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6樓2014-01-13 17:37:11
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