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a83875785鐵桿木蟲 (著名寫手)
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[交流]
用的pCDNA-5重組質(zhì)粒，通過測序檢驗質(zhì)粒+目的基因是否構(gòu)建成功 已有2人參與
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| 用的pCDNA-5重組質(zhì)粒，通過測序檢驗質(zhì)粒+目的基因是否構(gòu)建成功,測序結(jié)果顯示測序后的堿基序列是99%配對，氨基酸序列也是99%配對，用的是NCBI上的配對分析，請問這樣能判斷我的測序結(jié)果是我原來的目的基因嗎？ |
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a83875785
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 抗腫瘤藥物藥理
4樓2014-01-12 14:05:18
a83875785
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測質(zhì)粒得到的序列比測PCR產(chǎn)物得到的序列信息更全，準(zhǔn)確度更高，原因如下： 1.一個測序反應(yīng)一般可以測出的序列長度有800bp左右，但是有一點要注意，從引物3'的位置以后約80bp的序列信息時測不出來的（可信度很低），這就導(dǎo)致你測PCR產(chǎn)物的話無法得到完整的序列信息，而測質(zhì)粒，引物一般會從載體上選擇來測目的片段的首尾序列，所以能夠測出完整的序列信息 2.PCR產(chǎn)物通過連接轉(zhuǎn)化整合到載體上并在受體菌中擴(kuò)增，每一個步驟都有一定概率的引起某個或某幾個堿基的突變，特別是當(dāng)片段內(nèi)有大量串聯(lián)重復(fù)片段的話在個別受體菌內(nèi)是容易被剪切和修改的，因此通過PCR產(chǎn)物測出的結(jié)果與測質(zhì)粒得到的結(jié)果并不完全一樣。 綜上，測重組質(zhì)粒得到的結(jié)果更可信！ |
2樓2014-01-10 16:45:49
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