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sckcf銅蟲(chóng) (小有名氣)
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我想做兩個(gè)基因的融合克隆表達(dá)，怎么設(shè)計(jì)引物使兩個(gè)基因融合��？ 已有2人參與
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我想做兩個(gè)基因的融合克隆表達(dá)，怎么設(shè)計(jì)引物使兩個(gè)基因融合啊？是不是需要兩個(gè)引物設(shè)計(jì)一個(gè)相同的酶切位點(diǎn)，先把兩基因擴(kuò)增出來(lái)，再雙酶切，用T4連接，就能成功融合了？？？謝謝各位大神了 |
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lvbobo823
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-01-15 08:30:20
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| 融合表達(dá)首先你確定哪個(gè)基因在前克隆這個(gè)基因片段時(shí)就要去掉終止子，必須保證后基因讀碼框與前基因一致。兩個(gè)基因融合一塊可以有兩種方式一是你所說(shuō)的添加酶切位點(diǎn)，但是麻煩些，你需要先克隆一個(gè)片段到某個(gè)中間載體上，酶切再連另一載體，當(dāng)然雙片段連接也可以但成功率較低。另一方法是做個(gè)overlap PCR直接克隆這兩個(gè)片段（引物上有共有序列）在一塊。一定要驗(yàn)證你的編碼框不能移位。 |
2樓2014-01-14 17:06:43
力亮
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3樓2014-01-14 18:11:40
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4樓2014-01-14 19:23:22
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5樓2014-01-16 12:26:06
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