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sckcf銅蟲 (小有名氣)
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我想做兩個基因的融合克隆表達(dá),怎么設(shè)計引物使兩個基因融合。 已有2人參與
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我想做兩個基因的融合克隆表達(dá),怎么設(shè)計引物使兩個基因融合?是不是需要兩個引物設(shè)計一個相同的酶切位點,先把兩基因擴增出來,再雙酶切,用T4連接,就能成功融合了???謝謝各位大神了![]() |
木蟲 (小有名氣)

鐵桿木蟲 (正式寫手)
| 融合表達(dá)首先你確定哪個基因在前克隆這個基因片段時就要去掉終止子,必須保證后基因讀碼框與前基因一致。兩個基因融合一塊可以有兩種方式一是你所說的添加酶切位點,但是麻煩些,你需要先克隆一個片段到某個中間載體上,酶切再連另一載體,當(dāng)然雙片段連接也可以但成功率較低。另一方法是做個overlap PCR直接克隆這兩個片段(引物上有共有序列)在一塊。一定要驗證你的編碼框不能移位。 |

銅蟲 (小有名氣)
木蟲 (小有名氣)

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