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一個(gè)關(guān)于酶切后質(zhì)粒載體構(gòu)建的問題 已有3人參與
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| 最近在將一個(gè)兩段帶有酶切位點(diǎn)（如a，b）的目的片段通過雙酶切后，連接到同樣雙酶切（a，b）的質(zhì)粒載體的多克隆位點(diǎn)上。問題在于，每次目的片段的濃度很大，但酶切時(shí)體系中用的量很少，比如20ul只用2ul，導(dǎo)致最終酶切成功后無法純化出濃度適合下一步連接實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)物，請各位指導(dǎo)一下。解決辦法是同比例放大酶切體系？還是什么別的方法？謝謝！ |
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7樓2014-01-21 10:14:30
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【答案】應(yīng)助回帖
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ab酶可同時(shí)用的話，載體、片段都回收以后，可以都切2ug,再直接加1.5V體積的DE-B過柱回收，估量，連接。 ab不能同時(shí)用，可以切3ug，酶要一個(gè)一個(gè)切。然后過柱回收，估量，連接。 連接時(shí)按那個(gè)公式計(jì)算加多少體積的載體和片段，片段可以稍多一點(diǎn)比較好。 連接時(shí)載體、片段每個(gè)幾十ng就夠用。 |
2樓2014-01-20 21:16:29
lvbobo823
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4樓2014-01-21 02:56:52
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