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一休陳金蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于二倍體釀酒酵母基因敲除的疑問 已有2人參與
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各位蟲友大家新年好。 我最近開始做二倍體釀酒酵母基因的敲除工作，現(xiàn)在遇到兩個疑問：其一，構(gòu)建一個（上游同源臂+G418抗性基因+下游同源臂）的敲除盒，一次轉(zhuǎn)化，有沒有可能將兩個等位基因同時敲除？這樣的話，我用菌落PCR驗證，P不出來目的基因條帶的且?guī)в蠫418抗性的菌落豈不就是敲除的陽性菌落？ 其二，如果第一點不成立，即是一個敲除盒經(jīng)過一次轉(zhuǎn)化只能敲除一個等位基因的話，第二個基因我怎么敲除呢？還望有二倍體釀酒酵母敲除經(jīng)驗的蟲友們多多指教！再次祝福大家新年快樂，馬年龍馬精神，百尺竿頭，更進一步！謝謝。 |
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一休陳
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5樓2014-02-13 15:37:32
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