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一休陳金蟲 (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于二倍體釀酒酵母基因敲除的疑問 已有2人參與
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各位蟲友大家新年好。 我最近開始做二倍體釀酒酵母基因的敲除工作，現(xiàn)在遇到兩個疑問：其一，構(gòu)建一個（上游同源臂+G418抗性基因+下游同源臂）的敲除盒，一次轉(zhuǎn)化，有沒有可能將兩個等位基因同時敲除？這樣的話，我用菌落PCR驗證，P不出來目的基因條帶的且?guī)в蠫418抗性的菌落豈不就是敲除的陽性菌落？ 其二，如果第一點不成立，即是一個敲除盒經(jīng)過一次轉(zhuǎn)化只能敲除一個等位基因的話，第二個基因我怎么敲除呢？還望有二倍體釀酒酵母敲除經(jīng)驗的蟲友們多多指教！再次祝福大家新年快樂，馬年龍馬精神，百尺竿頭，更進一步！謝謝。 |
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2樓2014-02-12 16:31:17
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3樓2014-02-13 15:21:40
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4樓2014-02-13 15:23:46
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5樓2014-02-13 15:37:32
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7樓2014-02-13 16:33:37
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8樓2014-02-13 21:09:16
一休陳
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單倍體的分離，我沒有找到合適的文獻�？吹綆灼形奈墨I，怕做不出來。主要是我對自己的技術(shù)有些擔心。覺得再去分離單倍體貌似更加麻煩。不知道你分離過單倍體嗎？如果做過釀酒酵母單倍體的分離，能否把你做釀酒酵母單倍體的方法發(fā)給我一下呢？我的郵箱xi_zhilang@126.com。萬分感謝。 |
9樓2014-02-14 09:03:18
10樓2014-02-14 10:02:27
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