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一休陳金蟲(chóng) (正式寫手)
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[求助]
關(guān)于二倍體釀酒酵母基因敲除的疑問(wèn) 已有2人參與
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各位蟲(chóng)友大家新年好。 我最近開(kāi)始做二倍體釀酒酵母基因的敲除工作，現(xiàn)在遇到兩個(gè)疑問(wèn)：其一，構(gòu)建一個(gè)（上游同源臂+G418抗性基因+下游同源臂）的敲除盒，一次轉(zhuǎn)化，有沒(méi)有可能將兩個(gè)等位基因同時(shí)敲除？這樣的話，我用菌落PCR驗(yàn)證，P不出來(lái)目的基因條帶的且?guī)в蠫418抗性的菌落豈不就是敲除的陽(yáng)性菌落？ 其二，如果第一點(diǎn)不成立，即是一個(gè)敲除盒經(jīng)過(guò)一次轉(zhuǎn)化只能敲除一個(gè)等位基因的話，第二個(gè)基因我怎么敲除呢？還望有二倍體釀酒酵母敲除經(jīng)驗(yàn)的蟲(chóng)友們多多指教！再次祝福大家新年快樂(lè)，馬年龍馬精神，百尺竿頭，更進(jìn)一步！謝謝。 |
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一休陳
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單倍體的分離，我沒(méi)有找到合適的文獻(xiàn)�？吹綆灼形奈墨I(xiàn)，怕做不出來(lái)。主要是我對(duì)自己的技術(shù)有些擔(dān)心。覺(jué)得再去分離單倍體貌似更加麻煩。不知道你分離過(guò)單倍體嗎？如果做過(guò)釀酒酵母單倍體的分離，能否把你做釀酒酵母單倍體的方法發(fā)給我一下呢？我的郵箱xi_zhilang@126.com。萬(wàn)分感謝。 |
9樓2014-02-14 09:03:18
2樓2014-02-12 16:31:17
yuanbo934
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3樓2014-02-13 15:21:40
一休陳
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4樓2014-02-13 15:23:46
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