極道始之魔

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 442.5
帖子: 84
在線: 39.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2648086

[交流] 牛激素蛋白純化復(fù)性研究

近期在做牛激素的一個(gè)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。從質(zhì)粒構(gòu)建到表達(dá)以及后期的純化。
1.蛋白的表達(dá)量占總蛋白的70%差不多
2.在蛋白純化過(guò)程中，小蛋白洗滌可以去除，但有幾條大蛋白很難洗去，不想過(guò)柱子，不知道有沒(méi)什么緩沖液可以洗的，見(jiàn)圖
3.在包涵體復(fù)性的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)在復(fù)性后的蛋白在透析后，有些許蛋白析出來(lái)，但大部分沒(méi)有，溶液看上去有點(diǎn)極淡藍(lán)色的感覺(jué)。
4。做得是一個(gè)融合蛋白，不知道是不是只有復(fù)性好的蛋白才切的完？每次跑膠都是一半多切完了，，融合蛋白還有一點(diǎn)
5.目的蛋白，下面還有一條蛋白，不知道什么原因。從別的文獻(xiàn)看也有這種情況，有時(shí)上面濃一點(diǎn)，有時(shí)下面濃一點(diǎn)，真是奇怪。同一種蛋白在不同狀態(tài)下會(huì)跑出不一樣的條帶嗎

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

求調(diào)劑已經(jīng)有1人回復(fù)
298求調(diào)劑一志愿中海洋已經(jīng)有3人回復(fù)
藥理學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有224人回復(fù)
求助苯磷硫胺JP 已經(jīng)有0人回復(fù)
100金幣阿莫西林克拉維酸鉀片BP藥典中提到的克拉維酸聚合物具體結(jié)構(gòu)式是啥？已經(jīng)有2人回復(fù)
藥學(xué)調(diào)劑申請(qǐng)自薦信，一志愿中南大學(xué) 已經(jīng)有1人回復(fù)
藥學(xué)349專碩求調(diào)劑已經(jīng)有1人回復(fù)
錦州醫(yī)科大學(xué)藥用生物材料（專業(yè)代碼1007Z1）招收調(diào)劑考生已經(jīng)有0人回復(fù)
錦州醫(yī)科大學(xué)藥用生物材料（專業(yè)代碼1007Z1）招收調(diào)劑考生已經(jīng)有1人回復(fù)
《左乙拉西坦注射液制備工藝研究、質(zhì)量控制和穩(wěn)定性研究》下載已經(jīng)有1人回復(fù)
膳食補(bǔ)充劑合規(guī)性交流已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

蛋白純化時(shí)目的蛋白沒(méi)有洗脫下來(lái) 已經(jīng)有14人回復(fù)
蛋白純化標(biāo)簽有哪些? 已經(jīng)有6人回復(fù)
95KD蛋白純化求助！�。。。。。�！已經(jīng)有7人回復(fù)
求教離子交換柱純化蛋白的問(wèn)題已經(jīng)有28人回復(fù)
關(guān)于Ni-NTA純化蛋白已經(jīng)有19人回復(fù)
蛋白酶分離純化已經(jīng)有6人回復(fù)
組氨酸標(biāo)記蛋白的純化已經(jīng)有6人回復(fù)
AMPK蛋白純化問(wèn)題討論已經(jīng)有21人回復(fù)
his標(biāo)簽蛋白純化，不掛柱已經(jīng)有18人回復(fù)
蛋白純化分離問(wèn)題已經(jīng)有19人回復(fù)
關(guān)于蛋白純化的問(wèn)題已經(jīng)有7人回復(fù)
【分享】蛋白質(zhì)純化個(gè)人總結(jié)2 已經(jīng)有38人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2014-02-19 15:04:58

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

wolfman840

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

DRDEPI: 1
應(yīng)助: 225 (大學(xué)生)
金幣: 3524.8
帖子: 702
在線: 63.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 902627

★ ★ ★ ★ ★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
極道始之魔: 金幣+4 2014-02-20 20:11:35

沒(méi)有圖啊。
1.小分子蛋白和大蛋白如果分子量差很多，可以用超濾或者梯度離心方法分開(kāi)。
2.復(fù)性蛋白可能存在理化環(huán)境改變后，蛋白結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致分子斷裂的情況，這個(gè)正常。在你看來(lái)極淡藍(lán)色是不是你表達(dá)的蛋白有金屬鍵或者原子，例如銅或者鎳。
3.你切的氨基酸點(diǎn)一樣的話，和復(fù)性好不好關(guān)系不大啊。只要酶用的對(duì)就好。除非你復(fù)性后理化環(huán)境不適合酶工作。
4.你帶MARK了沒(méi)，沒(méi)圖沒(méi)真相，不好判斷。一般來(lái)說(shuō)就是降解，不過(guò)要看距離和條帶分布來(lái)判斷的。

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2014-02-20 11:13:15

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

極道始之魔

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 442.5
帖子: 84
在線: 39.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2648086

引用回帖:

2樓: Originally posted by wolfman840 at 2014-02-20 11:13:15
沒(méi)有圖啊。
1.小分子蛋白和大蛋白如果分子量差很多，可以用超濾或者梯度離心方法分開(kāi)。
2.復(fù)性蛋白可能存在理化環(huán)境改變后，蛋白結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致分子斷裂的情況，這個(gè)正常。在你看來(lái)極淡藍(lán)色是不是你表達(dá)的蛋白有金 ...

沒(méi)用過(guò)超濾，不過(guò)超濾的話蛋白損失應(yīng)該很大。
斷鏈的話，就加了nacl和咪唑，這個(gè)就沒(méi)辦法了
切這個(gè)蛋白的酶也是識(shí)別切掉部分空間結(jié)構(gòu)的
可能降解了，但是蛋白一般應(yīng)該不會(huì)降解啊

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2014-02-20 20:14:21

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

極道始之魔

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 442.5
帖子: 84
在線: 39.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2648086

圖1

照片(1).JPG

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2014-02-20 20:21:58

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

極道始之魔

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 442.5
帖子: 84
在線: 39.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2648086

圖2

照片 3.JPG

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2014-02-20 20:23:54

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

極道始之魔

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 442.5
帖子: 84
在線: 39.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2648086

圖3

照片 1(1).JPG

贊一下

回復(fù)此樓

6樓2014-02-20 20:26:40

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

極道始之魔

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 442.5
帖子: 84
在線: 39.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2648086

圖1中，第1條marker，第2條純化的融合蛋白，第3條酶切后的圖片，分子量大小在20kd左右，出現(xiàn)了幾條帶感覺(jué)好奇詭。圖2，是透析復(fù)性的圖。圖3是復(fù)性完的液倒在燒杯里，現(xiàn)在還不知道復(fù)性的蛋白它的溶液是成什么樣子的

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2014-02-20 20:31:31

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

userhung

禁蟲(chóng) (文學(xué)泰斗)

應(yīng)助: 1505 (講師)
貴賓: 1.347
金幣: 107941
帖子: 122982
在線: 4265.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 119626

★
極道始之魔: 金幣+1 2014-02-20 20:49:50

幫頂，blessing, blessing, blessing ! ~~~

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2014-02-20 20:33:45

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

極道始之魔

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 442.5
帖子: 84
在線: 39.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2648086

引用回帖:

9樓: Originally posted by userhung at 2014-02-20 20:33:45
幫頂，blessing, blessing, blessing ! ~~~

謝謝，希望可以得到解惑

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2014-02-20 20:49:33

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

wolfman840

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

DRDEPI: 1
應(yīng)助: 225 (大學(xué)生)
金幣: 3524.8
帖子: 702
在線: 63.2小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 902627

★
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

我看你的電泳圖，沒(méi)啥異常啊，就自下而上的三個(gè)條帶來(lái)說(shuō)，酶切的那個(gè)分子量有點(diǎn)詭異，不過(guò)也差不多位置啊。
至于做超濾，得看你的分子量，用5kd的做透析，損失不大的。
看你透析后的溶液，感覺(jué)蛋白好濃，是不是聚集了啊

贊一下

回復(fù)此樓

» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）

極道始之魔

12樓2014-02-27 12:52:09

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

極道始之魔

銀蟲(chóng) (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 442.5
帖子: 84
在線: 39.7小時(shí)
蟲(chóng)號(hào): 2648086

送紅花一朵

引用回帖:

12樓: Originally posted by wolfman840 at 2014-02-27 12:52:09
我看你的電泳圖，沒(méi)啥異常啊，就自下而上的三個(gè)條帶來(lái)說(shuō)，酶切的那個(gè)分子量有點(diǎn)詭異，不過(guò)也差不多位置啊。
至于做超濾，得看你的分子量，用5kd的做透析，損失不大的。
看你透析后的溶液，感覺(jué)蛋白好濃，是不是聚 ...

位置是差不多，但是有2條帶，麻煩啊，應(yīng)該是聚集了。離心的話可以離心出沉淀的。主要是在蛋白復(fù)性方面也沒(méi)有什么人指導(dǎo)，不知道到底接下來(lái)要怎么弄

贊一下

回復(fù)此樓

13樓2014-02-28 15:56:28

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

簡(jiǎn)單回復(fù)

血性紅魔7樓

2014-02-20 20:26 回復(fù)

極道始之魔11樓

2014-02-20 20:50 回復(fù)

引用回帖:

7樓: Originally posted by 血性紅魔 at 2014-02-20 20:26:52

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 265求調(diào)劑 +4	梁梁校校 2026-03-19	4/200	2026-03-20 00:03 by 23Postgrad
[考研] 材料學(xué)碩318求調(diào)劑 +5	February_Feb 2026-03-19	5/250	2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 081700化工學(xué)碩調(diào)劑 +3	【1】 2026-03-16	3/150	2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 296求調(diào)劑 +3	www_q 2026-03-18	6/300	2026-03-19 22:28 by zhq0425
[考研] 一志愿武漢理工材料工程專碩調(diào)劑 +5	Doleres 2026-03-19	5/250	2026-03-19 20:14 by 制度的
[考研] 0817調(diào)劑 +3	沒(méi)有答案_ 2026-03-14	3/150	2026-03-19 09:51 by Xu de nuo
[考研] 274求調(diào)劑 +6	S.H1 2026-03-18	6/300	2026-03-19 09:34 by 花店相見(jiàn)
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +5	z1z2z3879 2026-03-18	5/250	2026-03-19 07:43 by BruceLiu320
[考研] 354求調(diào)劑 +4	Tyoumou 2026-03-18	7/350	2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 【同濟(jì)軟件】軟件（085405）考研求調(diào)劑 +3	2026eternal 2026-03-18	3/150	2026-03-18 19:09 by 搏擊518
[考研] 一志愿武理材料305分求調(diào)劑 +5	想上岸的鯉魚(yú) 2026-03-18	6/300	2026-03-18 17:53 by 無(wú)際的草原
[考研] 303求調(diào)劑 +4	睿08 2026-03-17	6/300	2026-03-18 11:01 by Iveryant
[考研] 268求調(diào)劑 +6	簡(jiǎn)單點(diǎn)0 2026-03-17	6/300	2026-03-18 09:04 by 無(wú)際的草原
[考研] 301求調(diào)劑 +9	yy要上岸呀 2026-03-17	9/450	2026-03-18 08:58 by 無(wú)際的草原
[考研] 301求調(diào)劑 +4	A_JiXing 2026-03-16	4/200	2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 302求調(diào)劑 +4	小賈同學(xué)123 2026-03-15	8/400	2026-03-17 10:33 by 小賈同學(xué)123
[考研] 0854控制工程 359求調(diào)劑可跨專業(yè) +3	626776879 2026-03-14	9/450	2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3	LJY9966 2026-03-15	5/250	2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[考研] 289求調(diào)劑 +4	這么名字咋樣 2026-03-14	6/300	2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 266求調(diào)劑 +4	學(xué)員97LZgn 2026-03-13	4/200	2026-03-14 08:37 by zhukairuo