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牛激素蛋白純化復(fù)性研究
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近期在做牛激素的一個相關(guān)實驗。從質(zhì)粒構(gòu)建到表達以及后期的純化。 1.蛋白的表達量占總蛋白的70%差不多 2.在蛋白純化過程中，小蛋白洗滌可以去除，但有幾條大蛋白很難洗去，不想過柱子，不知道有沒什么緩沖液可以洗的，見圖 3.在包涵體復(fù)性的過程中，發(fā)現(xiàn)在復(fù)性后的蛋白在透析后，有些許蛋白析出來，但大部分沒有，溶液看上去有點極淡藍色的感覺。 4。做得是一個融合蛋白，不知道是不是只有復(fù)性好的蛋白才切的完？每次跑膠都是一半多切完了，，融合蛋白還有一點 5.目的蛋白，下面還有一條蛋白，不知道什么原因。從別的文獻看也有這種情況，有時上面濃一點，有時下面濃一點，真是奇怪。同一種蛋白在不同狀態(tài)下會跑出不一樣的條帶嗎 |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
極道始之魔: 金幣+4 2014-02-20 20:11:35
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
極道始之魔: 金幣+4 2014-02-20 20:11:35
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沒有圖啊。 1.小分子蛋白和大蛋白如果分子量差很多，可以用超濾或者梯度離心方法分開。 2.復(fù)性蛋白可能存在理化環(huán)境改變后，蛋白結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致分子斷裂的情況，這個正常。在你看來極淡藍色是不是你表達的蛋白有金屬鍵或者原子，例如銅或者鎳。 3.你切的氨基酸點一樣的話，和復(fù)性好不好關(guān)系不大啊。只要酶用的對就好。除非你復(fù)性后理化環(huán)境不適合酶工作。 4.你帶MARK了沒，沒圖沒真相，不好判斷。一般來說就是降解，不過要看距離和條帶分布來判斷的。 |
2樓2014-02-20 11:13:15
3樓2014-02-20 20:14:21
4樓2014-02-20 20:21:58
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10樓2014-02-20 20:49:33
極道始之魔12樓2014-02-27 12:52:09
13樓2014-02-28 15:56:28
簡單回復(fù)
血性紅魔7樓
2014-02-20 20:26
回復(fù)
極道始之魔11樓
2014-02-20 20:50
回復(fù)
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