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qinghuaihulu鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
細(xì)菌real time RT-PCR 已有2人參與
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| 我從一種植物的果莢上洗脫下來(lái)細(xì)菌菌體，提取RNA，欲通過(guò)熒光PCR的方法來(lái)確定菌體中某個(gè)基因的表達(dá)情況，這個(gè)基因部分片段的普通PCR引物已經(jīng)知道。請(qǐng)哪位給予指導(dǎo)下，我如何來(lái)完成這個(gè)實(shí)驗(yàn)。 |
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wangyue115
木蟲(chóng) (正式寫手)
冰山火種
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2樓2014-04-17 00:14:36
Jacob_24
木蟲(chóng) (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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很簡(jiǎn)單，首先分析一下引物 看看合不合適 不合適自己設(shè)計(jì) 看你是選用染料(SYBR Green or SYTO9?) 還是探針（分子信標(biāo) or置換探針 or Taq Man 水解探針 or ...) 接下來(lái)確定擴(kuò)增體系： 優(yōu)化引物 ，buffer，酶，Mg2+，探針用量及 退火溫度， 最后看看擴(kuò)增曲線 用-ΔΔCt看一下表達(dá)情況，AbI的機(jī)子可以直接把分析結(jié)果倒出來(lái) 很方便。 其他的BioRad or RoChe貌似也可以，試試看 |
3樓2014-04-17 11:50:36
qinghuaihulu
鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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4樓2014-04-18 21:58:35
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