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renaizhu8986新蟲 (初入文壇)
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[求助]
請問怎樣設計引物，完全聽不懂老師講的 已有2人參與
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| 怎樣設計引物，請回答的詳細點，謝謝 |
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hgdcongcong
木蟲 (著名寫手)
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【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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引物設計有非常細的注意事項，從網(wǎng)上直接搜即可獲得大量資料，建議樓主去搜集一些學習。 設計引物首先要保證引物與模板的序列要緊密互補，其次引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結構，還有就是引物不能在模板的非目的位點發(fā)生錯配。 以下是一般原則： 1.引物最好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設計。 2.引物長度一般在15~30堿基之間。 3.引物GC含量在40%~60%之間，Tm值最好接近72℃。 4.引物3′端要避開密碼子的第3位。 5.引物3′端不能選擇A，最好選擇T。 6. 堿基要隨機分布。 7. 引物自身及引物之間不應存在互補序列。 8. 引物5′ 端和中間△G值應該相對較高，而3′ 端△G值較低。 9.引物的5′端可以修飾，而3′端不可修飾。 10. 擴增產(chǎn)物的單鏈不能形成二級結構。 11. 引物應具有特異性。 |
3樓2014-04-24 16:42:12
伊天_1990
銅蟲 (初入文壇)
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2樓2014-04-24 13:54:27
dllchina
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4樓2014-04-24 21:40:53
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