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renaizhu8986新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)問(wèn)怎樣設(shè)計(jì)引物，完全聽(tīng)不懂老師講的 已有2人參與
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| 怎樣設(shè)計(jì)引物，請(qǐng)回答的詳細(xì)點(diǎn)，謝謝 |
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dllchina
木蟲(chóng) (著名寫手)
有機(jī)的微生物大神
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4樓2014-04-24 21:40:53
伊天_1990
銅蟲(chóng) (初入文壇)
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2樓2014-04-24 13:54:27
hgdcongcong
木蟲(chóng) (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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引物設(shè)計(jì)有非常細(xì)的注意事項(xiàng)，從網(wǎng)上直接搜即可獲得大量資料，建議樓主去搜集一些學(xué)習(xí)。 設(shè)計(jì)引物首先要保證引物與模板的序列要緊密互補(bǔ)，其次引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，還有就是引物不能在模板的非目的位點(diǎn)發(fā)生錯(cuò)配。 以下是一般原則： 1.引物最好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)。 2.引物長(zhǎng)度一般在15~30堿基之間。 3.引物GC含量在40%~60%之間，Tm值最好接近72℃。 4.引物3′端要避開(kāi)密碼子的第3位。 5.引物3′端不能選擇A，最好選擇T。 6. 堿基要隨機(jī)分布。 7. 引物自身及引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列。 8. 引物5′ 端和中間△G值應(yīng)該相對(duì)較高，而3′ 端△G值較低。 9.引物的5′端可以修飾，而3′端不可修飾。 10. 擴(kuò)增產(chǎn)物的單鏈不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。 11. 引物應(yīng)具有特異性。 |
3樓2014-04-24 16:42:12
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