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楓大帥木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
水煮法提取幽門(mén)螺桿菌的DNA 已有1人參與
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用水煮法提取幽門(mén)螺桿菌的DNA容易受哪些因素影響？為什么我提取的濃度比較低？ 如何提高DNA提取濃度？請(qǐng)各位兄弟姐妹們支個(gè)招，具體的操作步驟，越詳細(xì)越好，跪謝大家了。。  |
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楓大帥
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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4樓2014-04-24 21:35:51
xiaoamuchong
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【答案】應(yīng)助回帖
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dllchina: 金幣+3 2014-04-24 21:27:19
楓大帥: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-04-24 21:37:15
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楓大帥: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-04-24 21:37:15
| 水煮法：革蘭氏陰性桿菌取過(guò)夜培養(yǎng)的菌液1.5mL加入到離心管中離心l1min，棄上清；沉淀加入0.6ml無(wú)菌去離子水，振i蕩混勻，100℃水浴10min后離心，上清作為DNA模板-20℃保存?zhèn)溆�。革蘭氏陽(yáng)性菌及革蘭氏陰性球菌取過(guò)夜培養(yǎng)的菌液1.5mL加入到離心管中離心l1min，棄上清；沉淀加入800ul丙酮后混均，放入-20℃冰箱中冰浴10min，7500rpm/rnin離心5min．棄上清，沉淀在室溫下放置5min．使丙酮蒸發(fā)干，再加入TE 100ul、10mg/ml溶菌酶100ul，37℃溫育20min．離心，沉淀加人TE600ul重懸．再加入15mg／ml蛋白酶K25ul．55℃溫育1h后煮10min，離心．上清作為DNA模板-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 水煮法得到的DNA濃度比傳統(tǒng)法要高，主要因?yàn)樗蠓ú襟E簡(jiǎn)潔，減少了操作過(guò)程中對(duì)DNA的損失及外源DNA污染機(jī)會(huì)。水煮法提取過(guò)程中不需要酚一氯仿抽提及乙醇沉淀，避免了對(duì)人體的危害，且所需費(fèi)用低，但水煮法提取的DNA純度較傳統(tǒng)法有小幅下降，主要是因?yàn)槌樘徇^(guò)程簡(jiǎn)單，DNA溶液中含有蛋白質(zhì)等雜質(zhì)無(wú)法完全去除。水煮法適用于對(duì)DNA純度要求不高的PcR、RAPD等實(shí)驗(yàn)。 |
2樓2014-04-24 19:26:51
xiaoamuchong
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5樓2015-01-19 14:26:44
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