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zhangjie_924新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
如何處理后鹽酸胍變性的蛋白液，跑SDS-PAGE電泳。 已有1人參與
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| 最近在做蛋白的純化，蛋白分離后，用鹽酸胍變性，通過(guò)AKTA純化蛋白，但沒(méi)有收集到蛋白。想知道蛋白液是否在掛柱子時(shí)流失，想對(duì)掛柱子的流出液跑SDS-PAGE膠檢測(cè)，但是流出液中有鹽酸胍，遇到loadingbuffere 析出白色物質(zhì)，無(wú)法跑電泳，這里求助高手，怎樣處理含有鹽酸胍的樣本來(lái)跑SDS-PAGE電泳。先謝謝謝謝啦，請(qǐng)各位高手多多幫助 |
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anyaxiong
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4樓2014-05-12 18:35:54
anyaxiong
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhangjie_924: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝 2014-05-12 09:50:08
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| 鹽酸胍處理的蛋白經(jīng)過(guò)處理后是可以用來(lái)進(jìn)行SDS-PAGE的，具體做法如下：1份（如50ul）鹽酸胍溶解的蛋白和9份(450ul)預(yù)冷的無(wú)水乙醇，混勻，-20攝氏度靜置5min，4℃，13000rpm離心10min，棄上清，然后用1ml預(yù)冷的75%的酒精將肉眼可見(jiàn)的蛋白團(tuán)塊重新懸浮起來(lái)，-20攝氏度靜置5min，4℃，13000rpm離心10min，棄上清，然后用50ul 5×Loading buffer 溶解蛋白團(tuán)塊，剩下來(lái)的就剩下煮樣跑膠了 |
2樓2014-05-09 20:25:19
zhangjie_924
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3樓2014-05-12 10:20:04
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5樓2014-06-12 15:02:05
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