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關(guān)于PCR連接后菌液鑒定的問題 已有10人參與
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| PCR連接完成后，質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)出單菌落后，進(jìn)行菌液鑒定并跑膠，出現(xiàn)的條帶大小是不是應(yīng)該是目的片段加兩引物大小？ |
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3樓2014-05-13 16:18:46
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4樓2014-05-13 17:32:57
【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
哈皮Bingo(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-05-14 09:06:48
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哈皮Bingo(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-05-14 09:06:48
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跑電泳，條帶有偏差很正常，原因很多，不要糾結(jié)。 我分享我的一個(gè)protocl，插入片段大于1000bp都能用。 1、連接轉(zhuǎn)化后挑單克隆到500ul培養(yǎng)液中（用1.5mlEP管即可） 2、搖4-5h后，取80ul菌液。 3、80ul菌液+20ul裂解液（主要成分是SDS和NaOH，自己去網(wǎng)上著配方�？梢杂帽椒哟妫�+20ul loading buffer。 4、震蕩15s，短暫離心。取20ul上清電泳。點(diǎn)樣的時(shí)候，一定要點(diǎn)空質(zhì)粒做對(duì)照。 一般會(huì)有4條帶，從上到下依次為細(xì)菌基因組、質(zhì)粒、28sRNA，18sRNA。和空質(zhì)粒做對(duì)照，出現(xiàn)比空質(zhì)粒跑的慢的帶，即為陽性克隆。 5、送100ul菌液測(cè)序，訂單上注明返質(zhì)粒。連提質(zhì)粒都省了。 |
5樓2014-05-13 18:15:41
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