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[求助]
關于PCR連接后菌液鑒定的問題 已有10人參與
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| PCR連接完成后，質粒轉化入感受態(tài)細胞培養(yǎng)出單菌落后，進行菌液鑒定并跑膠，出現(xiàn)的條帶大小是不是應該是目的片段加兩引物大�。� |
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Neo2000
木蟲 (著名寫手)
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4樓2014-05-13 17:32:57
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3樓2014-05-13 16:18:46
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
哈皮Bingo(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2014-05-14 09:06:48
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哈皮Bingo(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2014-05-14 09:06:48
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跑電泳，條帶有偏差很正常，原因很多，不要糾結。 我分享我的一個protocl，插入片段大于1000bp都能用。 1、連接轉化后挑單克隆到500ul培養(yǎng)液中（用1.5mlEP管即可） 2、搖4-5h后，取80ul菌液。 3、80ul菌液+20ul裂解液（主要成分是SDS和NaOH，自己去網上著配方。可以用苯酚代替）+20ul loading buffer。 4、震蕩15s，短暫離心。取20ul上清電泳。點樣的時候，一定要點空質粒做對照。 一般會有4條帶，從上到下依次為細菌基因組、質粒、28sRNA，18sRNA。和空質粒做對照，出現(xiàn)比空質粒跑的慢的帶，即為陽性克隆。 5、送100ul菌液測序，訂單上注明返質粒。連提質粒都省了。 |
5樓2014-05-13 18:15:41
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