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園園補(bǔ)補(bǔ)鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
為什么提取RNA時(shí)出現(xiàn)一坨白色沉淀 已有13人參與
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| 提取RNA快一年時(shí)間了，之前提取效果一直很好，可是近兩次卻出現(xiàn)了出題：用Trizol提取RNA，加入異丙醇離心后就會(huì)出現(xiàn)一坨白色沉淀，用75%乙醇洗滌沉淀離心后依舊有很明顯的白色沉淀，檢測的A260/A280比值低于1.8，A260/A230比值低于2.0，（之前的實(shí)驗(yàn)沒有出現(xiàn)過很明顯的白色沉淀，而且A260/A280和A260/A230比值都很正常）。。。很困惑，實(shí)驗(yàn)沒辦法進(jìn)行了。。。 |
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Neo2000
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3樓2014-05-27 15:13:23
飛約瘋?cè)嗽?/a>
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科學(xué)怪人
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-05-27 19:04:44
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樓主，請仔細(xì)看下我們的步驟： 按照TRizol一步法制備總RNA，其步驟簡述如下：取膜莢黃芪的葉片500 mg，于液氮預(yù)冷的研缽中，液氮速凍后充分研磨成粉末，加入到加有5 mL TRizol的15 mL離心管中，混勻，室溫放置5 min，使其充分裂解12 000 rpm，離心5 min，棄沉淀。加入1mL氯仿，震蕩混和均勻后放于冰上15 min，于4 ℃，12000 rpm 離心15min。取上清液到新的離心管中，加入等量體積異丙醇，顛倒混合均勻，-20℃ 放置20 min以上，4 ℃，12 000 rpm離心10 min。去上清，加入5 mL 75 %冰乙醇，懸浮沉淀，4℃，12 000 rpm離心5 min，去上清，重復(fù)2次。在室溫陰涼處空氣干燥或真空干燥RNA沉淀。加入50 μL DEPC H2O溶解RNA，將抽提好的總RNA 保存于-70 ℃冰箱中。 |
2樓2014-05-27 14:43:40
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4樓2014-05-28 09:34:37
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5樓2014-05-28 09:35:06
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