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園園補(bǔ)補(bǔ)

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[求助] 為什么提取RNA時(shí)出現(xiàn)一坨白色沉淀已有13人參與

提取RNA快一年時(shí)間了，之前提取效果一直很好，可是近兩次卻出現(xiàn)了出題：用Trizol提取RNA，加入異丙醇離心后就會(huì)出現(xiàn)一坨白色沉淀，用75%乙醇洗滌沉淀離心后依舊有很明顯的白色沉淀，檢測的A260/A280比值低于1.8，A260/A230比值低于2.0，（之前的實(shí)驗(yàn)沒有出現(xiàn)過很明顯的白色沉淀，而且A260/A280和A260/A230比值都很正常）。。。很困惑，實(shí)驗(yàn)沒辦法進(jìn)行了。。。

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1樓 2014-05-27 14:34:23

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園園補(bǔ)補(bǔ)(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-11-12 20:31:54

以前遇到過這種問題。這樣處理，加入氯仿離心分層后，吸取上清需要小心，不要吸到中層白色的東西或下層紅色有機(jī)相，否則pellet會(huì)有不溶于水的白色沉淀。如果樓主不介意提取量，取一部分上清就可以了，剩下的不要，這樣可以避免蛋白或多糖污染。用這種方法，260/230 一般都能到1.9以上。
希望能幫到。

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30樓2014-06-16 13:20:47

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25樓: Originally posted by huanzhizhu at 2014-06-14 11:31:26
同感，基本每次提取RNA都會(huì)出現(xiàn)某些管子白色沉淀，看了此樓瞬間表示傷不起！...

額額，

傷不起是什么個(gè)情況嘛？難道白色沉淀不是RNA

？越是沒有表示越純？瞬間凌亂了。。。。

反正我前三個(gè)管子在棄上清時(shí)候發(fā)現(xiàn)有一坨白色沉淀，干燥時(shí)候沒有及時(shí)觀察，干燥的久了一些，我一看，里面東西沒有了，變透明了，嚇了我一跳，目測這三管不大好溶解啊，

后面幾組就及時(shí)溶解了，后天跑PCR，希望結(jié)果良好。

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27樓2014-06-14 11:44:08

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飛約瘋?cè)嗽?/a>

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【答案】應(yīng)助回帖

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gyesang: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-05-27 19:04:44

樓主，請仔細(xì)看下我們的步驟：
按照TRizol一步法制備總RNA，其步驟簡述如下：取膜莢黃芪的葉片500 mg，于液氮預(yù)冷的研缽中，液氮速凍后充分研磨成粉末，加入到加有5 mL TRizol的15 mL離心管中，混勻，室溫放置5 min，使其充分裂解12 000 rpm，離心5 min，棄沉淀。加入1mL氯仿，震蕩混和均勻后放于冰上15 min，于4 ℃，12000 rpm 離心15min。取上清液到新的離心管中，加入等量體積異丙醇，顛倒混合均勻，-20℃ 放置20 min以上，4 ℃，12 000 rpm離心10 min。去上清，加入5 mL 75 %冰乙醇，懸浮沉淀，4℃，12 000 rpm離心5 min，去上清，重復(fù)2次。在室溫陰涼處空氣干燥或真空干燥RNA沉淀。加入50 μL DEPC H2O溶解RNA，將抽提好的總RNA 保存于-70 ℃冰箱中。

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2樓2014-05-27 14:43:40

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Neo2000

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gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-05-27 19:04:55

很明顯，那陀?xùn)|西不是你要的RNA咯，一般是糖沒有除干凈。

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3樓2014-05-27 15:13:23

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 飛約瘋?cè)嗽?/i> at 2014-05-27 14:43:40
樓主，請仔細(xì)看下我們的步驟：
按照TRizol一步法制備總RNA，其步驟簡述如下：取膜莢黃芪的葉片500 mg，于液氮預(yù)冷的研缽中，液氮速凍后充分研磨成粉末，加入到加有5 mL TRizol的15 mL離心管中，混勻，室溫放置5 mi ...

方法其實(shí)都是大同小異，我之前就是用Trizol一步法制備，都沒出現(xiàn)過這種白色沉淀現(xiàn)象，只是最近兩次才出現(xiàn)的，會(huì)不會(huì)是我用的試劑出現(xiàn)問題了或是被污染了。。。

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4樓2014-05-28 09:34:37

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3樓: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-27 15:13:23
很明顯，那陀?xùn)|西不是你要的RNA咯，一般是糖沒有除干凈。

是否可以用氯仿再次抽提一下

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5樓2014-05-28 09:35:06

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4樓: Originally posted by 園園補(bǔ)補(bǔ) at 2014-05-28 09:34:37
方法其實(shí)都是大同小異，我之前就是用Trizol一步法制備，都沒出現(xiàn)過這種白色沉淀現(xiàn)象，只是最近兩次才出現(xiàn)的，會(huì)不會(huì)是我用的試劑出現(xiàn)問題了或是被污染了。。。

...

那就重新配藥品吧，用DEPC處理過的水，可能有污染了

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6樓2014-05-28 09:56:38

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引用回帖:

5樓: Originally posted by 園園補(bǔ)補(bǔ) at 2014-05-28 09:35:06
是否可以用氯仿再次抽提一下...

除糖一般是加鹽的

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7樓2014-05-28 11:06:12

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6樓: Originally posted by 飛約瘋?cè)嗽?/i> at 2014-05-28 09:56:38
那就重新配藥品吧，用DEPC處理過的水，可能有污染了...

打算試試。。。

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8樓2014-05-28 14:23:31

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引用回帖:

7樓: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-28 11:06:12
除糖一般是加鹽的
...

什么？可以具體點(diǎn)兒不

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9樓2014-05-28 14:24:14

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我也懷疑樓主所用東西污染了。。

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時(shí)刻為夢想而戰(zhàn)！！

10樓2014-05-28 16:13:14

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