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1990xuxiao

銀蟲 (正式寫手)

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在線: 117.3小時(shí)
蟲號: 1463182
注冊: 2011-10-27
專業(yè): 生物化學(xué)

[求助] 關(guān)于酵母基因敲除

我最近在做酵母基因敲除，敲除用的片段用的是目的基因的上下游同源片段，每個(gè)片段大小在250左右，將兩個(gè)片段分別插入到pMD18T中，片段的方向與目的片段的一致，兩個(gè)片段間距離只有十幾bp間隔，電轉(zhuǎn)入酵母后，在五氟乳清酸平板上生長出幾個(gè)克隆，劃線于MD和MD-ura平板上，前者只有劃線的痕跡，后者能夠迅速生長，但提基因組和菌落直接PCR批出來的片段都是原長750bp的，請問這樣的片段能夠通過單交換或者雙交換進(jìn)行同源重組嗎？另外補(bǔ)充一點(diǎn)，這個(gè)酵母產(chǎn)品說明書上說是包含了spores，是不是有可能是雙倍體呢，那么只是敲出了一半的話也應(yīng)該批出兩個(gè)片段來呀！希望大家?guī)兔⒖紖⒖迹?

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1樓 2014-06-06 09:37:03

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