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[求助] pet28和pet21表達(dá)的蛋白對(duì)于蛋白結(jié)晶的區(qū)別已有3人參與

各位蟲友，有誰(shuí)做過蛋白結(jié)晶嗎？我正在考慮是用pET28還是pET21作為我的表達(dá)載體來表達(dá)我的目的蛋白。pET28表達(dá)我的目的蛋白的話會(huì)附帶上兩個(gè)His標(biāo)簽，可能導(dǎo)致我的蛋白過大，而pET21表達(dá)出來的目的蛋白酶活性沒有pET28的高。我正在考慮用哪個(gè)載體表達(dá)更好？各位蟲友給點(diǎn)建議啊!感激不盡！

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1樓 2014-06-06 10:20:40

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飛約瘋?cè)嗽?/a>

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好好看看圖譜就知道了“
http://wenku.baidu.com/link?url= ... UW92jx2V0E8DtOxCg0S

http://wenku.baidu.com/link?url= ... lxuAusI1z_vLAYhwBu7

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人生貴在行動(dòng)，遲疑不決時(shí)，不妨先邁出小小一步。

2樓2014-06-06 15:17:48

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younghe

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【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1

引入一個(gè)3C或者TEV酶切位點(diǎn)到28a的his后面，就可以把標(biāo)簽切除了

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3樓2014-06-06 16:19:11

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2樓: Originally posted by 飛約瘋?cè)嗽?/i> at 2014-06-06 15:17:48
好好看看圖譜就知道了“
http://wenku.baidu.com/link?url=Dp3jmdNN_yhLb_f0wk0Dc9vQy0GTLLOMuym1FVEs7xrF38K_JHTAe4n0Gp3UKJ3EuhJ8jk9amA0j-UfrMvsjk5_GUW92jx2V0E8DtOxCg0S

http://wenku.baidu.com/link?ur ...

能稍微解釋一下嗎？比如我是不是要用凝血酶切除前面的肽段啊?但是我的目的蛋白酶本身不是很穩(wěn)定，我怕這樣一折騰，我的酶會(huì)喪失比較多的酶活性。

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4樓2014-06-07 14:11:05

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3樓: Originally posted by younghe at 2014-06-06 16:19:11
引入一個(gè)3C或者TEV酶切位點(diǎn)到28a的his后面，就可以把標(biāo)簽切除了

您好，請(qǐng)問這個(gè)怎么引入呢？能稍微具體點(diǎn)嗎？

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5樓2014-06-07 14:11:41

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5樓: Originally posted by liyaohui1990 at 2014-06-07 14:11:41
您好，請(qǐng)問這個(gè)怎么引入呢？能稍微具體點(diǎn)嗎？...

額，改造載體啊，加一段蛋白序列就可以了啊，玩蛋白晶體的應(yīng)該很熟悉的

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6樓2014-06-07 22:41:54

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liyaohui1990(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-08 16:34:59

用28a，切除一個(gè)HIS標(biāo)簽就好了呀，，沒必要帶兩個(gè)標(biāo)簽。

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7樓2014-06-08 13:13:06

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7樓: Originally posted by viki_MDK at 2014-06-08 13:13:06
用28a，切除一個(gè)HIS標(biāo)簽就好了呀，，沒必要帶兩個(gè)標(biāo)簽。

我在構(gòu)建的時(shí)候沒有加終止密碼子，那我現(xiàn)在怎么切除一個(gè)His標(biāo)簽?zāi)兀?

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8樓2014-06-08 20:59:25

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6樓: Originally posted by younghe at 2014-06-07 22:41:54
額，改造載體啊，加一段蛋白序列就可以了啊，玩蛋白晶體的應(yīng)該很熟悉的...

不是很明白啊。我才開始接觸蛋白結(jié)晶，文獻(xiàn)還沒看幾篇，很菜鳥的，麻煩您指教。比如加什么樣的蛋白序列呢？

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9樓2014-06-08 21:00:33

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