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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 蛋白電泳/WB » 求助！WB條帶不清楚
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zhllhzzhl銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助！WB條帶不清楚 已有1人參與
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小弟做western blot有段時間了， 最近做小鼠DC細胞 A20的干擾，結果western blot不知怎么了， 第一次做的時候能用抗體砸的出來，但后面重復的時候卻總是跑得很臟，條帶不清。 請教各位大神，不知是否有遇到這樣的情況？還請各位不吝賜教！謝謝啦 PS：1.中間變化的條件主要是轉(zhuǎn)膜條件由100A 50mins 換到100v 60mins，有可能因為轉(zhuǎn)過了么？（100A 50mins 最上2條條帶沒完全轉(zhuǎn)過來） 2. 由于懷疑是wb中涉及buffer的原因（圖2），做過dot plot檢驗試劑，的確實用的RIPA buffer對抗體有反應， 所以后面用重新配制過，結果還是一樣（圖三，下面一道為beta-actin，上面模糊的就是我要的條帶） 3. A20大約分子量90kd， 但是砸出來的大概只有80kd，這樣應該還正常吧？ 4. 為了得到條帶，最近增長曝光時間，結果發(fā)現(xiàn)在用A20抗體的時候直接砸出了一條大概30+kd的條帶 圖4（曝光直接先出來的） 5. 有可能是蛋白降解么？ 但是如果是蛋白降解 beta-actin條帶也還是很清晰；gel也同時跑了平行樣，烤藍對照排除gel的問題 第一次跑的條帶 圖2 后面跑的條帶 第一道為loding buffer 第二道為marker 圖3 圖4 |
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biotech_zhou
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zhllhzzhl
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3樓2014-07-07 08:17:36
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