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huoxingyihao新蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
huoxingyihao: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-08-27 16:13:32
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
huoxingyihao: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-08-27 16:13:32
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額，你這個(gè)還真不知道怎么說(shuō)，你只有試試看了 1，模板是提取的基因組還是做菌落PCR，我們實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)在做PCR常用EP管裝30Ul無(wú)菌水將劃線的菌挑一點(diǎn)，沸水煮10分鐘，PCR效果非常，你可以試試； 2，其次看你的體系有沒(méi)有問(wèn)題，這個(gè)應(yīng)該沒(méi)啥問(wèn)題的 3，引物的特異性強(qiáng)不強(qiáng)，采用軟件設(shè)計(jì)引物除了看得分外還看引物之間會(huì)不會(huì)形成二聚體之類的，發(fā)夾結(jié)構(gòu)什么的。 4，你說(shuō)的1Kb的帶應(yīng)該不是很大，引物多長(zhǎng)？20堿基左右嗎？引物太長(zhǎng)退火時(shí)的時(shí)間考慮增加一下，并且退火溫度做個(gè)梯度，52——58度試試吧。 PCR似乎是個(gè)最基本的克隆技術(shù)，引物是很重要的，主要關(guān)注一下引物和退火溫度及時(shí)間吧。 |
2樓2014-07-04 23:23:23
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