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wyysunshine木蟲 (知名作家)
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[求助]
求助：AT含量高的序列如何PCR？ 已有1人參與
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最近跑了一個(gè)序列，約750 bp。 降落PCR：1. 94度4 min；2. 94度30 s，3. 62度30 s，-1度/cycle，4. 63度1 min，5. go to 2，12次；6. 94度30 s，7. 57度30 s，8. 63度1 min，9. go to 6，24次；10. 63度10 min；11. 12度保存。 之后又試了不同的延伸溫度，68啦，65啦，60啦都試過，可還是跑出來引物二聚體很多，帶沒有，就少數(shù)幾個(gè)跑出來了。 把跑出來的幾個(gè)進(jìn)行回收測序，發(fā)現(xiàn)是我要的目的條帶，但就是AT含量高達(dá)70%，請教下大家，AT含量高就很不好PCR嗎？這個(gè)引物是自己根據(jù)現(xiàn)有的序列設(shè)計(jì)的，也不知道好不好，但通過Blast比對顯示跟大多數(shù)植物是可以跑的出來的。PS，我這個(gè)是跑的它的一個(gè)內(nèi)含子。謝謝各位大神支支招吧！3Q 小博士叩謝大家�。�！ LEAFY.gif |
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jurkat.1640
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2樓2014-07-21 17:34:41
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