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sarah-miao銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
高GC模板含量的PCR擴增？ 已有1人參與
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| 請教大家高GC模板含量的擴增？如何擴增，有哪家的酶比較好用，PCR過程中需要注意些什么事項，還望各位賜教！ |
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飛約瘋?cè)嗽?/a>
專家顧問 (著名寫手)
科學(xué)怪人
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2014-06-18 22:13:55
sarah-miao: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2014-06-19 08:01:58
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1 建議用生工的：高GC含量模板PCR擴增試劑盒： 2 原因如下： PCR反應(yīng)中有時由于引物或模板中GC含量過高導(dǎo)致雙鏈變性及引物與模板退火困難，并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的時候很容易就失活，從而導(dǎo)致PCR失敗。生工針對高GC含量和復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板設(shè)計的PCR buffer及HotTaq DNAPolymerase可增強反應(yīng)的特異性及穩(wěn)定性，從而獲得好的實驗結(jié)果。 3 影響因素： 影響PCR反應(yīng)的因素很多，如果發(fā)現(xiàn)PCR反應(yīng)沒有得到所需產(chǎn)物或條帶較弱，建議用試劑盒中提供的25mmol/L MgCl2調(diào)節(jié)反應(yīng)體系中的Mg2+濃度，以期獲得更好的結(jié)果。 |
2樓2014-06-18 20:03:27
sarah-miao
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3樓2014-06-19 08:01:49
4樓2014-06-23 09:25:59
sarah-miao
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5樓2014-06-24 12:33:54
北化方華
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6樓2014-08-02 19:33:05
7樓2014-08-02 20:12:01
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8樓2014-08-04 09:04:13
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9樓2016-02-25 22:54:04
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