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sarah-miao銀蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
高GC模板含量的PCR擴(kuò)增？ 已有1人參與
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| 請(qǐng)教大家高GC模板含量的擴(kuò)增？如何擴(kuò)增，有哪家的酶比較好用，PCR過(guò)程中需要注意些什么事項(xiàng)，還望各位賜教！ |
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sarah-miao
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5樓2014-06-24 12:33:54
飛約瘋?cè)嗽?/a>
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科學(xué)怪人
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【答案】應(yīng)助回帖
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1 建議用生工的：高GC含量模板PCR擴(kuò)增試劑盒： 2 原因如下： PCR反應(yīng)中有時(shí)由于引物或模板中GC含量過(guò)高導(dǎo)致雙鏈變性及引物與模板退火困難，并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的時(shí)候很容易就失活，從而導(dǎo)致PCR失敗。生工針對(duì)高GC含量和復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板設(shè)計(jì)的PCR buffer及HotTaq DNAPolymerase可增強(qiáng)反應(yīng)的特異性及穩(wěn)定性，從而獲得好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 3 影響因素： 影響PCR反應(yīng)的因素很多，如果發(fā)現(xiàn)PCR反應(yīng)沒(méi)有得到所需產(chǎn)物或條帶較弱，建議用試劑盒中提供的25mmol/L MgCl2調(diào)節(jié)反應(yīng)體系中的Mg2+濃度，以期獲得更好的結(jié)果。 |
2樓2014-06-18 20:03:27
sarah-miao
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3樓2014-06-19 08:01:49
4樓2014-06-23 09:25:59
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