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sarah-miao銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
高GC模板含量的PCR擴(kuò)增? 已有1人參與
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| 請(qǐng)教大家高GC模板含量的擴(kuò)增?如何擴(kuò)增,有哪家的酶比較好用,PCR過(guò)程中需要注意些什么事項(xiàng),還望各位賜教! |
專家顧問(wèn) (著名寫手)
科學(xué)怪人
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專家經(jīng)驗(yàn): +140 |
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1 建議用生工的:高GC含量模板PCR擴(kuò)增試劑盒: 2 原因如下: PCR反應(yīng)中有時(shí)由于引物或模板中GC含量過(guò)高導(dǎo)致雙鏈變性及引物與模板退火困難,并且普通Taq DNAPolymerase在98℃的時(shí)候很容易就失活,從而導(dǎo)致PCR失敗。生工針對(duì)高GC含量和復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的模板設(shè)計(jì)的PCR buffer及HotTaq DNAPolymerase可增強(qiáng)反應(yīng)的特異性及穩(wěn)定性,從而獲得好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 3 影響因素: 影響PCR反應(yīng)的因素很多,如果發(fā)現(xiàn)PCR反應(yīng)沒(méi)有得到所需產(chǎn)物或條帶較弱,建議用試劑盒中提供的25mmol/L MgCl2調(diào)節(jié)反應(yīng)體系中的Mg2+濃度,以期獲得更好的結(jié)果。 |

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