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hajierlove銅蟲 (正式寫手)
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[求助]
菌液pcr,坐等求助 已有7人參與
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| 今天做的菌液pcr，三個(gè)基因挑了48個(gè)單克隆，做菌液pcr，引物是M13通用引物，出來的目的條帶都是250bp。750bp。目的片段是500bp。怎么回事？只能證明沒有連接上嗎？ |
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胡亞梅
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3樓2014-07-23 21:40:31
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-24 09:31:49
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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-07-24 09:31:49
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你的載體是哪個(gè)牌子的？如果是pMD19-T的話一般用M13通用引物的話除了你的目的基因在基因兩端會(huì)多擴(kuò)出150bp以上的一段載體片段，所以你的那個(gè)750bp的片段可能是對(duì)的，而你的那個(gè)250bp的片段可能擴(kuò)的是空載體。 拿你擴(kuò)增出750bp片段的菌再用你擴(kuò)基因的引物做個(gè)菌落PCR，或者直接提取質(zhì)粒雙酶切驗(yàn)證都可以，只要大小正確就可以去測(cè)序了。 |
5樓2014-07-23 22:37:42
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