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hnsea銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
細(xì)菌質(zhì)粒提取及ＰＣＲ 已有4人參與
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如題，細(xì)菌用小提試劑盒提取質(zhì)粒，濃度在幾十至100ug/ml。 進(jìn)行多個相關(guān)耐藥基因（200-500bp）擴(kuò)增并電泳檢測，沒有一個條帶。marker(1000bp)也不亮，沒完全分開。 是操作設(shè)計不好嗎��？ 請分析下原因。 pcr條件如下:94度預(yù)熱5-8min，94變性40S，Tm減5度退火40S,72度再延伸40s，重復(fù)30個循環(huán)，72度再延伸5min，4度保持。 瓊脂糖電泳條件:1%的膠，120ev，120mA. |
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【答案】應(yīng)助回帖
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hnsea: 金幣+2, ★有幫助 2014-07-29 22:50:54
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
hnsea: 金幣+2, ★有幫助 2014-07-29 22:50:54
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I give you a experiment plan: first: Agarose electrophoresis conditions: 0.8% glue, 120 V, 100mA. second: PCR conditions : preheated 94 degrees 9 min, 94 modified 30S, annealing of 30S, extends 30s, repeated for 28 cycles, 72 degrees and then extends 5min, 4 degrees. |
6樓2014-07-29 14:24:20
songzuowei
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4樓2014-07-28 10:51:00
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