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hnsea銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)菌質(zhì)粒提取及ＰＣＲ 已有4人參與
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如題，細(xì)菌用小提試劑盒提取質(zhì)粒，濃度在幾十至100ug/ml。 進(jìn)行多個相關(guān)耐藥基因（200-500bp）擴(kuò)增并電泳檢測，沒有一個條帶。marker(1000bp)也不亮，沒完全分開。 是操作設(shè)計(jì)不好嗎��？ 請分析下原因。 pcr條件如下:94度預(yù)熱5-8min，94變性40S，Tm減5度退火40S,72度再延伸40s，重復(fù)30個循環(huán)，72度再延伸5min，4度保持。 瓊脂糖電泳條件:1%的膠，120ev，120mA. |
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【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 回帖置頂 2014-07-29 16:41:11
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gyesang: 回帖置頂 2014-07-29 16:41:11
| 一半電泳時電壓120V電流不會有那么高吧，當(dāng)電流升高太多，這個時候電泳緩沖液肯定是要換了的。如果片段較小，可以采用較大濃度的膠（1.5%-2%），電壓80-100v可能能跑的更清楚，PCR模板的話濃度達(dá)到10都完全可以用，如果有100，擔(dān)心模板中可能有污染物，你可稀釋十倍在做模板也行。質(zhì)粒抽提一般都可以達(dá)到上百吧。PCR條件沒多少問題，退火溫度可以嘗試優(yōu)化一下，變性、退火、延伸30s都足夠，循環(huán)一般30-35。 |
7樓2014-07-29 15:19:22
songzuowei
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4樓2014-07-28 10:51:00
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