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[求助]
RNA提取及電泳求助！ 已有2人參與
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| 各位前輩們你們好，我最近提RNA（肌肉組織）總是260/280比值偏高，有的都超過2.1甚至是2.2了，跑瓊脂糖凝膠電泳時(shí)5s特別亮，這是為什么啊，還有就是有的260/280比值在1.96左右時(shí)，RNA電泳是5S 還是很亮，希望在這方面有經(jīng)驗(yàn)的大神好好講解一下，不是很懂的或是不確定的就不要回復(fù)了。 |
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songzuowei
木蟲 (著名寫手)
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2樓2014-08-08 09:08:20
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+4, 鼓勵(lì)交流！ 2014-08-09 21:26:50
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正如二樓蟲友所說，RNA降解比較嚴(yán)重。 原因分析：我前幾天也提了一次RNA（動(dòng)物組織），效果也不好，可能是夏天天氣太熱，各種酶（特別是RNase）活性比較高，加之操作的時(shí)候可能受到影響，提取用到的器材不凈等因素影響，導(dǎo)致RNA降解比較厲害，理論上電泳之后應(yīng)該是18S和28S比較亮的。 建議解決方案：對RNA提取器材（研缽、EP管、槍頭（最好直接使用RNA槍頭）等再次用DEPC水浸泡并滅菌），操作時(shí)嚴(yán)格佩戴手套口罩，整個(gè)提取過程開著空調(diào)，盡量使溫度低一點(diǎn)，跑電泳時(shí)加大電壓，縮短時(shí)間（建議使用200V跑十分鐘），除了要求的室溫放置，其他的盡量在冰盒中進(jìn)行。 些許建議，僅作參考，祝好運(yùn) |
3樓2014-08-09 09:44:49
ice-bamboo
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4樓2016-02-18 08:41:03
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