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糾結(jié)的面包新蟲 (初入文壇)
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[求助]
直接用DNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR可行嗎？ 已有3人參與
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| 作為剛接觸分子生物的小白，老板也不太了解熒光定量PCR,只是給出任務(wù)說要用類似的方法檢測(cè)土壤中產(chǎn)CA功能菌及CA表達(dá)的變化情況。因?yàn)橥寥乐刑崛NA難度太高，所以放棄了檢測(cè)CA表達(dá)量的變化，在看了相關(guān)文獻(xiàn)后，看到有人說可以直接提取宏基因組，然后以特定功能基因?yàn)槟０暹M(jìn)行PCR之后制作質(zhì)粒，通過和標(biāo)準(zhǔn)品CT值的對(duì)比可以得出功能菌的豐度變化情況，請(qǐng)問可行嗎？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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這個(gè)很簡(jiǎn)單：絕對(duì)定量 1. 測(cè)量300mg土壤，提取DNA。 2. 設(shè)計(jì)CA（猜測(cè)是產(chǎn)甲烷桿菌），的引物，PCR 3. 克隆并測(cè)序：將PCR產(chǎn)物電泳，純化，TA克隆，得到質(zhì)粒，進(jìn)行拷貝數(shù)換算。 4. qPCR檢測(cè)，得到具體拷貝數(shù)（換算成XX拷貝數(shù)/mg土壤） |
6樓2014-09-09 16:19:06
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7樓2014-09-10 08:41:54
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