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糾結(jié)的面包

新蟲(chóng) (初入文壇)

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[求助] 直接用DNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR可行嗎？已有3人參與

作為剛接觸分子生物的小白，老板也不太了解熒光定量PCR,只是給出任務(wù)說(shuō)要用類(lèi)似的方法檢測(cè)土壤中產(chǎn)CA功能菌及CA表達(dá)的變化情況。因?yàn)橥寥乐刑崛NA難度太高，所以放棄了檢測(cè)CA表達(dá)量的變化，在看了相關(guān)文獻(xiàn)后，看到有人說(shuō)可以直接提取宏基因組，然后以特定功能基因?yàn)槟０暹M(jìn)行PCR之后制作質(zhì)粒，通過(guò)和標(biāo)準(zhǔn)品CT值的對(duì)比可以得出功能菌的豐度變化情況，請(qǐng)問(wèn)可行嗎？

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1樓 2014-09-08 16:22:20

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xipha

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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5樓: Originally posted by 糾結(jié)的面包 at 2014-09-09 16:15:02
CA是碳酸酐酶，老板的意思是既然酶的表達(dá)量測(cè)定不出來(lái)，就想驗(yàn)證下產(chǎn)CA的典型菌的豐度和溶蝕量是不是成正比，目前是在研究一株從當(dāng)?shù)赝寥乐泻Y選出來(lái)的細(xì)菌，想著設(shè)計(jì)引物對(duì)CA基因進(jìn)行PCR后制作質(zhì)粒，通過(guò)和標(biāo)準(zhǔn)品曲 ...

這個(gè)事沒(méi)問(wèn)題的. 酶的表達(dá)量沒(méi)辦法測(cè)酶活或者做westernblot么?

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7樓2014-09-10 08:41:54

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biot

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糾結(jié)的面包: 金幣+1 2014-09-13 01:34:43

完全可行，你要提取盡量高質(zhì)量的DNA，設(shè)計(jì)好引物，構(gòu)建好質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，最后可計(jì)算出拷貝數(shù)

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2樓2014-09-08 19:58:38

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引用回帖:

2樓: Originally posted by biot at 2014-09-08 19:58:38
完全可行，你要提取盡量高質(zhì)量的DNA，設(shè)計(jì)好引物，構(gòu)建好質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品，最后可計(jì)算出拷貝數(shù)

謝謝！如果可能的話(huà)有沒(méi)有相關(guān)的文獻(xiàn)推薦？麻煩了

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3樓2014-09-09 09:14:36

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xipha

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-09-09 09:54:04
糾結(jié)的面包: 金幣+1 2014-09-13 01:34:50

用DNA的話(huà), 測(cè)該菌的量是可以的. 如果你的CA(不知道是什么)是蛋白或者功能蛋白產(chǎn)物,用DNA是無(wú)法得到表達(dá)量變化的.

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4樓2014-09-09 09:29:27

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