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中原攬轡銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
轉(zhuǎn)化后做藍(lán)白斑篩選,平板長(zhǎng)出藍(lán)白斑后挑取白班PCR鑒定陰性,是什么原因? 已有5人參與
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| 轉(zhuǎn)化后做藍(lán)白斑篩選,平板涂布15小時(shí)后長(zhǎng)出藍(lán)白斑,挑取白班增菌培養(yǎng)后PCR鑒定全部顯示陰性。PCR直接用菌液跑的,請(qǐng)問出現(xiàn)這種狀況是因?yàn)檗D(zhuǎn)化沒成功還是PCR有問題? |
木蟲 (正式寫手)

木蟲 (正式寫手)

| 不太清楚你用的是什么載體,但是有些載體在酶切后是可以自連的,結(jié)果就和插入了目的片段一樣表現(xiàn)為白斑。因此藍(lán)白斑不是確定陽性的唯一、準(zhǔn)確方法,還需要PCR、測(cè)序等等。應(yīng)對(duì)這種情況應(yīng)該多挑幾個(gè)克隆,一般來說一個(gè)載體挑8~12個(gè)就可以了。 |
銅蟲 (初入文壇)
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木蟲 (正式寫手)

金蟲 (初入文壇)
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