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95846713新蟲 (初入文壇)
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pet28a 空質(zhì)粒雙酶切圖像問題 已有1人參與
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本人新手，最近做蛋白表達，前期做克隆，想先把表達載體空質(zhì)粒pet28a雙酶切 空質(zhì)粒大小5369bp，但是圖像把我搞迷糊了，希望各位高手指點迷津 第一張圖是第一個孔是2000Marker 當時加錯了 第二個孔 BamH I和EcoR I 雙酶切 pet28a 第三個是先BamH I單酶切再EcoR I單酶切 第四個是EcoR I SaL I 雙酶切 第五個是15000Marker 提pet28a質(zhì)粒濃度比較低，用的洗脫水80ul 體系10ul buffer2ul 質(zhì)粒6ul 酶各1ul 正常情況雙酶切應(yīng)該有兩個片段，我的為什么只有一個 小片段呢 ， 還有看pet28a圖譜 BamH I和EcoR I兩個酶挨著 有人說不能切？我的圖是切下來了嗎？不然怎么會有小片段 第二張圖第一個孔15000Marker 2-7都是雙酶切就是酶用的不一樣，可惜忘記加空質(zhì)粒對照了 但是6.7buffer加錯了BamH I和SaL I應(yīng)該加Tbuffer 我加了H buffer 好像沒切下來 看圖像比前四個高一點 應(yīng)該可以當做空質(zhì)粒對照吧，是不是可以證明前四個切下來了 就是切下來的片段太小了濃度太低 看不到？ 這張圖是只有載體 沒有目的片段 我真不知道切沒切下來 體系20ul 載體8ul 酶各0.5ul buffer2ul 加 ddH2O到20ul 提空質(zhì)粒時加洗脫水80ul同樣濃度很低 綜合分析這兩個圖 體系不同 一個有小片段，一個只有質(zhì)粒 這是什么原因 怎么改進？另外BamH I和EcoR I到底能不能切pet28a�。� 3J%06B$}86)2SNJG~2X]HO6.jpg D79158FB275241E5AA31F57F2AEC522B.jpg |
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5樓2014-09-11 08:11:18
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