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走過(guò)路過(guò)的大俠幫忙啊-----重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化后抽提質(zhì)粒濃度低 已有3人參與
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| 請(qǐng)問(wèn)各位大俠，我將目的片段和載體，雙酶切（快切）20min，跑膠檢驗(yàn)沒(méi)問(wèn)題后連接轉(zhuǎn)化，然后挑取一些菌株活化抽提質(zhì)粒，檢測(cè)出來(lái)質(zhì)粒濃度20-30ng/ul,不知道是為什么，請(qǐng)各位走過(guò)路過(guò)的大俠指點(diǎn)迷津�。。。。。。� |
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10樓2014-09-22 10:45:10
youlinglyw
榮譽(yù)版主 (著名寫(xiě)手)
一匡天下
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專(zhuān)家經(jīng)驗(yàn): +37 - BioEPI: 5
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2樓2014-09-16 21:09:23
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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你這個(gè)問(wèn)題可以從兩方面來(lái)考慮： 首先，不知道樓主有沒(méi)有檢測(cè)抽提出來(lái)的質(zhì)粒是否為所需的質(zhì)粒（可以PCR鑒定和酶切鑒定），如果是，那么說(shuō)明之前的酶切、連接、轉(zhuǎn)化是沒(méi)有問(wèn)題的，那么問(wèn)題就出來(lái)抽提質(zhì)粒上，可能的原因有兩個(gè)，一是菌的問(wèn)題，即濃度太低或者或者質(zhì)粒兼容性不好，前者解決辦法就是加長(zhǎng)搖菌時(shí)間，后者解決辦法就是換感受態(tài)菌株，重新轉(zhuǎn)化； 第二，如果檢測(cè)結(jié)果表明所抽提核酸（可能是混進(jìn)的菌株基因組DNA或者RNA）不是所需質(zhì)粒，那么問(wèn)題就在酶切、連接、轉(zhuǎn)化上了，建議逐一排查各步可能出現(xiàn)的問(wèn)題，方法就是加進(jìn)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。 個(gè)人見(jiàn)解，僅供參考 |
3樓2014-09-16 22:12:46
4樓2014-09-17 08:56:50
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