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sinky熹銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
多重PCR敏感性實(shí)驗(yàn) 已有1人參與
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| 不知道大家有沒有優(yōu)化過多重PCR的反應(yīng)條件。我剛開始做多重，用的是tag-PCR擴(kuò)增兩輪的方法。在進(jìn)行質(zhì)粒敏感性檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)第二輪PCR后低濃度模板對(duì)應(yīng)的PCR產(chǎn)物均拖尾了，高濃度模板對(duì)應(yīng)的PCR產(chǎn)物均正常，請(qǐng)問大家知道這是什么原因嗎？我該怎么優(yōu)化？ |
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zhangyunjing
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-09-25 20:59:20
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| 多重PCR是指一個(gè)反應(yīng)體系中同時(shí)擴(kuò)增多條目的條帶，你這個(gè)實(shí)驗(yàn)確定是做多重PCR嗎？多重PCR的關(guān)鍵在于選擇合適的熱啟動(dòng)酶，減少非特異性擴(kuò)增和引物二聚體的生成。自己優(yōu)化需要很長(zhǎng)時(shí)間，而且需要測(cè)試很多種酶。不如自己直接買相關(guān)產(chǎn)品，很多公司有多重PCR試劑盒。 |
2樓2014-09-25 14:09:40
sinky熹
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3樓2014-09-25 15:47:07
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4樓2014-11-01 11:12:59
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