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為什么qpcr目的基因和內(nèi)參跑出來(lái)的膠不一樣亮 已有1人參與
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| 有一個(gè)疑問，既然目的基因和內(nèi)參都到了平臺(tái)期，為什么跑出來(lái)的條帶不一樣亮，我跑了39個(gè)循環(huán)，內(nèi)參15個(gè)循環(huán)到達(dá)指數(shù)期，目的基因25個(gè)循環(huán)到達(dá)指數(shù)期，但是他們都在39個(gè)循環(huán)之前到達(dá)了平臺(tái)期，且熒光強(qiáng)度一樣，那么為什么我跑膠的話，內(nèi)參條帶的亮度遠(yuǎn)大于目的基因？ |
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pennchem
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【答案】應(yīng)助回帖
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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-10-03 22:19:48
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-10-03 22:19:48
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這和機(jī)器相關(guān)，機(jī)器讀熒光的時(shí)候也是有一個(gè)范圍的，條件允許的話，可以把sybr green逐步摻入濃度很高的質(zhì)�；騊CR產(chǎn)物，然后放入機(jī)器里面讀，會(huì)有一個(gè)上限。 如果達(dá)到這個(gè)上限后，再增加熒光物質(zhì)（sybr green），閱讀值已經(jīng)飽和了。 一個(gè)不太恰當(dāng)?shù)谋扔�，你用一個(gè)量程為100g的稱，所有超過100g的東西，最后都只能顯示為100g |
4樓2014-10-03 22:11:59
pennchem
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-02 21:12:47
lmc2537: 金幣+5, ★有幫助 2014-10-03 21:49:29
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信息不夠全，我假設(shè)你用Taqman探針法， 在這樣的情況下，最終你檢測(cè)的信號(hào)不是PCR產(chǎn)物信號(hào)，而是探針?biāo)夂蟮男盘?hào)，總的信號(hào)取決于你探針的總量。如果內(nèi)標(biāo)和目的探針濃度一樣，所以最終檢測(cè)信號(hào)一樣。盡管你內(nèi)參產(chǎn)物更濃，可是已經(jīng)沒有足夠多的探針來(lái)顯示了，飽和了。 按照你提供的信息，你的內(nèi)標(biāo)更早的達(dá)到飽和。 |
2樓2014-10-02 20:50:12
3樓2014-10-03 21:49:21
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