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jiaoxiayoulu新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
載體構(gòu)建后誘導(dǎo)不表達(dá) 已有2人參與
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各位蟲(chóng)友，我有個(gè)問(wèn)題一直困擾我：我在將目的基因插入表達(dá)載體中時(shí)，我的目的基因擴(kuò)增引物是這樣的：上游引物GGGGTACC -gcATGTCTAACCAAATATACTCAGCG 下游引物：ACATGCATGC -TCCGATAATGTTCCAAAGGAAGC 這個(gè)構(gòu)建的載體是做基因敲除后回補(bǔ)用的，我想問(wèn)的是上游引物中在酶切位點(diǎn)和起始密碼子之間多了兩個(gè)堿基gc對(duì)表達(dá)有影響嗎？我用的載體是Pyes2，啟動(dòng)子是半乳糖誘導(dǎo)表達(dá)的gal1！但是誘導(dǎo)后SDS-PAGE后含有表達(dá)載體的酵母和含有空載體的酵母對(duì)照后條帶都一樣！這樣是否能說(shuō)明我的表達(dá)載體沒(méi)有表達(dá)呢？做了快一個(gè)月了還沒(méi)做出來(lái)，快畢業(yè)了！求指教啊 |
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2樓2014-10-13 11:25:08
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5樓2014-10-20 10:29:52
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6樓2015-02-04 11:07:29
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