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littlefly1980新蟲 (初入文壇)
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[求助]
細(xì)菌熒光定量PCR的內(nèi)參 已有4人參與
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各位大俠： 我想在在做細(xì)菌的熒光定量PCR，染料法，以前很多文章中都用16SrRNA做內(nèi)參，可是我聽一個(gè)同事說(shuō)現(xiàn)在用16SrRNA做內(nèi)參，國(guó)外的文章都不承認(rèn)。可是要自己篩選內(nèi)參真的不容易，因?yàn)檫@個(gè)細(xì)菌的基因組序列不知道，只能根據(jù)相近的菌的基因組設(shè)計(jì)引物，又要再保守區(qū)設(shè)計(jì)，又要特異擴(kuò)增，真的不容易。我剛剛設(shè)計(jì)了幾對(duì)都沒成功！ 請(qǐng)問 1.用16SrRNA做內(nèi)參，是不是真的國(guó)外的文章都不接受？ 2.大家做細(xì)菌的熒光定量PCR都用什么做內(nèi)參？ 3.都自己篩選內(nèi)參嗎？ 萬(wàn)分感謝！ |
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cjl25413477
木蟲 (正式寫手)
歐巴
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 鼓勵(lì)交流 2014-10-13 15:55:34
littlefly1980(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-10-15 15:00:08
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1.用16SrRNA做內(nèi)參，是不是真的國(guó)外的文章都不接受？ 這個(gè)不是絕對(duì)的，不過大多數(shù)的sci都不接受！ 2.大家做細(xì)菌的熒光定量PCR都用什么做內(nèi)參？ 內(nèi)參的選擇，有很多文獻(xiàn)都有提到的，中文的英文的都有，ldh這個(gè)應(yīng)該可以 3.都自己篩選內(nèi)參嗎？ 有好的內(nèi)參就大家一起分享了，畢竟自己篩選太麻煩了，看到文獻(xiàn)里有提到的就拿來(lái)用就好了！ |
2樓2014-10-13 15:42:47
3樓2014-10-13 16:08:35
littlefly1980
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4樓2014-10-14 09:13:53
littlefly1980
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5樓2014-10-15 11:14:05
【答案】應(yīng)助回帖
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可以用細(xì)菌的持家基因作為內(nèi)參嗎？銅綠acsA-F ACCTGGTGTACGCCTCGCTGAC acsA-R GACATAGATGCCCTGCCCCTTGAT aroE-F TGGGGCTATGACTGGAAACC aroE-R TAACCCGGTTTTGTGATTCCTACA guaA-F CGGCCTCGACGTGTGGATGA guaA-R GAACGCCTGGCTGGTCTTGTGGTA mutL-F CCAGATCGCCGCCGGTGAGGTG mutL-R CAGGGTGCCATAGAGGAAGTC nuoD-F ACCGCCACCCGTACTG nuoD-R TCTCGCCCATCTTGACCA ppsA-F GGTCGCTCGGTCAAGGTAGTGG ppsA-R GGGTTCTCTTCTTCCGGCTCGTAG trpE-F GCGGCCCAGGGTCGTGAG trpE-R CCCGGCGCTTGTTGATGGTT |
6樓2015-04-23 21:45:44
請(qǐng)叫我悠悠
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【答案】應(yīng)助回帖
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您好 我的是假單胞菌 您知道這個(gè)內(nèi)參的引物序列嗎？有沒有論文參考 做了好久了 ct值都偏大 25左右 跟目的基因差不多的ct值 求幫忙 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2017-06-02 12:48:56
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