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yajune木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
熒光定量PCR標準曲線的問題 已有2人參與
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投了篇毒理學的文章，審稿人提出了關(guān)于熒光定量PCR的優(yōu)化問題，我的QPCR就是按照試劑盒進行的，就是所有測的基因都按照一個擴增方法（試劑盒推薦的）就都能擴出來，所以可能也不需要優(yōu)化吧。但是關(guān)于標準曲線的問題，我有點不明白，我的QPCR做的是相對定量，也就是把對照組當作1，然后計算處理組的相對表達值；這種半定量也需要標準曲線么？還是說審稿人指的是擴增曲線呢？下邊是審稿人的原話，麻煩比較懂得同學幫我分析一下，謝謝啦 How were the QPCR assays optimised: no details are currently given and the authors state everything was run at the same temperature. What was the efficiency and correlation coefficient for the standard curves in each case? If appropriate validation was not conducted the dataset is not valid. If this was conducted, please add details to the supplemental table. 另外審稿人還提了一個選擇內(nèi)參基因的問題，我用的是beta-actin，但是審稿人貌似覺得這個內(nèi)參不合適。。。問我是如何證明它的表達是穩(wěn)定的，這個問題我還真沒考慮過，因為我是看大部分文獻都以beta-actin為內(nèi)參，我就理所當然的用了這個，請問一下這個問題從技術(shù)上講有比較好的解決辦法么？或者說有什么比較好的回答方法么？ |
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