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tinychan新蟲 (初入文壇)
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pcr 重復(fù)不出來 已有1人參與
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構(gòu)建載體要添加酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)了引物(前面序列為添加酶切位點(diǎn)序列），以整個(gè)ORF的T載體為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。 Primer F：5’-ggaattccatATGAAGGCCCGCTTAACGCA-3’ (Tm=65.4) Primer R：5’-ccggaattCCTAGAACCAAGAAGACACTGAATA-3’ (Tm=64.11) 第一次以BIOTAKE的2XPower Taq PCR MasterMix 做了個(gè)退火溫度梯度（58-68℃），結(jié)果每個(gè)溫度都可以P出來，亮度還差不多，片段大小一致，沒有非特異性； 想著要測(cè)序，然后我換了TAKARA的LA Taq 做了一下，幾次結(jié)果都沒出來，這是什么原因呢？ 換了Ex TAQ 做了一次，結(jié)果可以出來，但卻有非特異性擴(kuò)增，為什么呢？ 新手求各位大神指教�。�！ |
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wangranjun
榮譽(yù)版主 (知名作家)
廣庭之惘然
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專家經(jīng)驗(yàn): +106 - 應(yīng)助: 108 (高中生)
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- 專業(yè): 藥物毒理
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2樓2014-10-21 17:55:00
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